生理实验十一 血液组成、红细胞比容和红细胞脆性试验以及瘤胃微生物观察及对饲料成分的消化分析.ppt

实验十一 血液组成、红细胞比容和红细胞脆性试验（实验）以及瘤胃微生物观察及对饲料成分的消化分析（示教）  血液组成和红细胞比容测定 目的：了解血液的组成，区别血浆、血清、血细胞及纤维蛋白，测定红细胞比容。 原理：血液是一种广义的结缔组织，它是由液态的血浆和悬浮于其中的血细胞所组成。抗凝情况下离心，由于血细胞比重略大于血浆，将出现分层，上部为血浆。下部压紧的血细胞占全血的体积比称为红细胞压积（packedcellvolum,简称PCV），又叫比容。若不加抗凝剂，血液凝固会析出血清。 实验对象：家兔 实验用品： 注射器、温（Wintrobe）氏比容管、吸管、离心机、抗凝剂（肝素钠等）。 步骤： 1）家兔以乌拉坦（1g/kg，i.v.）麻醉、背位固定 2）颈总动脉插管（用0.1％肝素溶液湿润）， 放血入肝素抗凝烧杯内 3）吸取10ml抗凝血徐徐注入温氏管，定容至刻度“0”,3000r/min离心30min。取出，读取血细胞柱刻度；再次离心5min,若刻度不变，即为血细胞压积值。 4）观察比容管中血液，上层为血浆，下层为红细胞，中间一白色薄层为白细胞和血小板。 5）读数，计算红细胞比容（％） 结果： 男：40～50％ 女：37～48％ 选做： 6）取新鲜血置试管中，静置片刻。可见浑浊的血变为一条血凝块，周围有清亮的血清析出。为加速此过程，可先离心几分钟或略加温。 7）取新鲜血置小烧杯中，立即用小竹刷搅动。取出竹刷，用自来水冲洗，可见上面缠绕的白色有韧性的纤维蛋白。脱纤维蛋白血不再凝固。 红细胞渗透脆性 目的：学习渗透脆性实验方法，进一步理解红细胞生理特性和血浆渗透压的理论知识。 原理：红细胞在低渗溶液中，会因过多水分进入红细胞而膨胀，甚至破裂，血红蛋白释出，称为溶血。红细胞膜对低渗溶液具有一定的抵抗力，这一特征称红细胞的渗透脆性（osmotic fragility）。 将血液滴入不同浓度的低渗溶液中，可检查红细胞膜对于低渗溶液抵抗力的大小。开始出现溶血现象的低渗溶液浓度为该血液红细胞的最小抵抗力，即最大脆性；出现完全溶血时的低渗溶液浓度则为该血液红细胞的最大抵抗力，即最小脆性。 材料和方法： 材料：家兔、兔手术台、哺乳动物手术器械一套、动脉夹、细塑料管（或动脉插管）、注射器和针头、20%氨基甲酸乙酯溶液、10ml 小试管、试管架、滴管、1ml 吸管、1% NaCl液、蒸馏水。 方法： 溶液配制 取小试管10 个，编号后排列于试管架上，按表6.1-1 要求向各试管内加入不同体积的1% NaCl 溶液和蒸馏水，配制出10 种不同浓度的NaCl 的低渗溶液：见下表 试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1%NaCl (ml) 0.90 0.65 0.60 0.55 0.5 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 蒸馏水（ml） 0.1 0.35 0.40 0.45 0.5 0.55 0.6 0.65 0.70 0.75 NaCl溶液浓度（%） 0.9 0.65 0.60 0.55 0.5 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 加抗凝血 用滴管吸取抗凝血，在各试管中各加1 滴，摇匀，静置1～2 h。 结果判断 根据各管中液体颜色和混浊度的不同，判断红细胞脆性。 未发生溶血的试管（－）：液体下层为混浊红色，上层为无色，表明无红细胞破裂。 部分溶血的试管（±）：液体下层为混浊红色，上层出现透明红色，表明部分红细胞已破裂，称为不完全溶血。 全部溶血的试管（＋）：液体完全变成透明红色，表明红细胞完全破裂，称为完全溶血。 结 果： 记录红细胞渗透脆性的范围，报告该血样的红细胞最小渗透抵抗力和最大渗透抵抗力。 注意事项： 配制不同浓度的低渗溶液时，小试管应干燥。加抗凝血量要准确一致。 混匀时，用手指堵住试管口，轻轻倾倒1～2 次，减少机械震动，避免人为的溶血。 抗凝剂最好用肝素，其他抗凝剂可改变溶液的渗透压。 讨 论： 红细胞的形态与生理特征有何关系？ 血浆晶体渗透压对红细胞形态和功能的影响及维持血浆晶体渗透压相对稳定的生理意义。 渗透脆性实验有什么意义？ 探索性问题： 设计一个能区分等渗溶液和等张溶液的实验方法。