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六. 磷光分光光度计 1. 光学系统与荧光分光光度计的区别 光源 样品池 激发 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 发射 单色器 切光器（斩波器） 共振荧光：10-12 sec 荧 光：10-8 sec 磷 光：1~10-4 sec 迟滞荧光：100~10-4 sec 2. 样品池与荧光分光光度计的区别 通常情况下，样品池需要放在盛液氮的石英杜瓦瓶内，来测定低温磷光。 §12.４ 荧光分析法的应用 一. 工作曲线法 荧光分析的灵敏度比紫外－可见分光光度法高103～104. 荧光熄灭工作曲线法 Fx F Cs Cx 直接荧光标准曲线法 F Cs Fx Cx 二. 荧光分析法的灵敏度 在紫外光照射下会发生荧光的无机化合物很少，主要依赖于有机试剂形成的螯合物。 三. 荧光分析的应用 1. 无机化合物 直接荧光测定法 其中，较常测定的元素有：Be、Al、B、Ga、Se、Mg、Zn、Cd与某些稀土元素；测定的灵敏度有些可以达到10-10; 某些元素虽然不与有机试剂形成发荧光的配合物，但是它会与发荧光的配合物争夺配位体，组成不发荧光的配合，使其产生荧光熄灭，由荧光熄灭的强度此该元素的含量。 较常测定的元素有：F、S、Fe、Ag、Co、Ni、Cu、Mo、W 荧光熄灭测定法 自从1867年Goppelsroder进行了历史上首次的荧光分析工作，应用铝—桑色素配合物的荧光进行铝的测定以来，采用有机试剂可以测定70多种元素。 催化荧光测定法 较常测定的元素有：Cr、Nb、U、Te、Pb 某些元素虽然与有机试剂形成发荧光的配合物，但是反应速度慢，在某些微量元素的催化下，反应速度会加快，在特定的时间内可用来测定微量元素。 低温荧光测定法 常测定的元素有：Cu、Be、Fe、Co、Os、Ag、Au、Zn、Al、Ti、V、Mn、Er、H2O2、CN 某些微量元素存在，会催化发荧光的配合物产生荧光熄灭，在特定的时间内可用来测定微量元素。 溶液温度的降低，显著增强溶液的荧光强度。液氮 －1960C 较常测定的元素有：Ce、Sm、Tb 等稀土元素 　　　　　　　　　Sb、V、Pb、Bi、Nb、Mn 固体荧光测定法 固体荧光发在荧光分析中也经常用到。 芳香族化合物存在共轭的不饱和体系，是有机化合物荧光测定的主要类型。 ２. 有机化合物 待测物 试剂 λ exmax λemmax 测定范围 ppm 丙三醇 苯胺 紫外 蓝色 0.1~2 糠　醛 蒽酮 465 505 1.5~15 氨基酸 氧化酶 315 425 0.01~50 维生素A 无水乙醇 345 490 0~20 蛋白质 曙红丫 紫外 540 0.06~6 肾上腺素 乙二胺 420 525 0.001~0.02 青霉素 α-甲氧基-６-氯-９-(β-氨乙基)-氨基氮杂蒽 420 500 0.0625~0.625 玻璃酸梅 3-乙酰氧基吲哚 395 470 0.001~0.033 胍基丁胺 邻苯二醛 365 470 0.05~5 四氧嘧啶 苯二胺 365 485 10-4 3. 生命与生物物质 紫外-可见分光光度计: 光源 样品池 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 荧光(磷光)分光光度计: 光源 样品池 激发 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 发射 单色器 紫外-可见分光光度计测量池(吸收池) 荧光分光光度计 样品池 I0 It I0 It IF,p 作业 1. 荧光光谱产生的本质是什么？ 2. 物质产生荧光光谱与其分子结构的关系是什么？ 3. 荧光熄灭的定义？有几种熄灭类型？ 4.荧光分析中有哪些影响因素？ 5. 影响荧光强度的外部因素？ 第15章 分子发光分析法（Molecular Luminescence Analysis） 分子吸收能量，电子由基态进入激发态，当电子由激发态返回基态时发射光谱 M+能量→M＊ →M+热量 →M+ h? ′+热量 光子 —— 光致发光 M+ h? →M ＊ 阴极射线—— 阴极射线发光 荧光 磷光 X 射线—— X 射线发光 F P 热—— 白炽发光 寿命10-7—10-9s 10-3—10s 超声波—— 声纳发光 离子流—— 离子发光 化学反应能——化学发光