罗伊乳酸杆菌甘油脱水酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的-微生物学报.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2009, December 25; 25(12): 1983-1988 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology I SSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn © 2009 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 研究报告 平丽英, 柳志强, 薛亚平, 郑裕国 , 310014 : 迅速升温的生物柴油投资热导致了其副产物甘油的大量积累, 这一现状使得开发和利用甘油生产各种精细化 工产品备受关注。本实验通过构建基因工程菌来生物转化甘油生产 3-羟基丙醛, 为甘油下游产品的开发开辟了一条新 途径。3-羟基丙醛是一种重要的化学中间体, 同时也是一种有效的抗菌剂和生物组织的固定剂, 在化学工业中具有广泛 的应用前景。实验主要利用甘油脱水酶N 末端序列, 并根据 NCBI 中公布的甘油脱水酶的氨基酸序列设计了一对克隆 引物, 并以菌株罗伊乳酸杆菌Lactobacillus reuteri 的基因组DNA 为模板进行PCR 扩增, 获得约为 1.6 kb 的片段, 将其 克隆到T 载体上进行测序, 对测序结果进行分析, 重新设计两端含有EcoR I 和Hind III 酶切位点的表达引物, 利用PCR 扩增得到了甘油脱水酶基因, 该基因片段长度为 1674 bp, 编码558 个氨基酸。将所得片段定向克隆到pET28b 载体中, 并转化至大肠杆菌BL21 感受态细胞中。经IPTG 诱导后, 进行SDS电泳, 在约65 kD 处检测出一蛋白表达条带, 另外还对该重组菌进行比活力测定, 最高比活力可达 1.14 U/mg, 比野生型菌株提高了86.88%。 : 乳酸杆菌, 甘油脱水酶, 克隆, 表达 Cloning and expression of Lactobacillus reuteri glycerol dehydratase gene in Escherichia coli Liying Ping, Zhiqiang liu, Yaping Xue, and Yuguo Zheng Institute of Bioengineering , Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310014, China Abstract: There is growing interest in biodiesel and this results in the accumulation of glycerol. The exploitation and application of glycerol has attracted more and more attention. In the current study, glycerol was biotransformed to produce 3-hydroxypropionaldehyde by genetic engineering bacteria. It is known that 3-hydroxypopionaldehyde has been widely used