第七章 免疫学技术在食品科学中的应用.ppt

如;牛乳、蜂蜜、动物内脏中庆大霉素、卡那霉素、新霉素等抗生素。 食品中农药残留检测等。现在有许多商业化的免疫检测试剂盒。 PCR-ELISA 免疫核酸探针技术 重组免疫结合试验 免疫生物传感器 免疫胶体金技术 斑点酶联免疫吸附检测 从这里开始，用功能性食品书。 P388 医学免疫学 1、通过染色镜检，计算淋巴细胞转化率。 2、 3.免疫标记技术 酶标记免疫学分析EIA 放射线标记免疫学分析RIA 免疫荧光法IF 放射线标记免疫学分析RIA 用放射性同位素标记抗原或抗体进行免疫 学检测的免疫标记技术。该法灵敏度高达pg。 常用的放射性同位素有125I 和 131I。 应用于食品安全检测，食品中农药残留、 激素等检测。 免疫荧光法IF 直接法—荧光素直接标记抗体，对标本进行检测。 特异性强，但任一抗原均需制备荧光素抗体 间接法—用第一抗体与标本中抗原结合，再用荧光素 标记的二抗进行检测。灵敏度高、荧光素标记的二抗 可用于多种抗原的检测，但非特异性荧光增多。 第二节 淋巴细胞的测定 测定淋巴细胞的功能，可以判断机体的细 胞免疫或体液免疫水平。 测定淋巴细胞功能试验应用于功能性食品 等研究中。 T淋巴细胞增殖试验 T细胞功能测定 细胞毒试验 T淋巴细胞增殖试验 T淋巴细胞在有丝分裂原或抗原刺激下可转化 为淋巴母细胞，产生一系列形态变化。细胞变 大、细胞浆增多、出现空泡、核仁明显、核染色 质疏松等。 T淋巴细胞增殖试验 形态学方法--镜检淋巴母细胞 3H-TdR掺入法—氚标记胸腺嘧啶核苷（Thymidine ribosode)渗入法。测定DNA增殖的量(也可用于测NK细胞活性) MTT比色法—细胞活化增殖水平（可溶性噻唑盐，代谢后产生兰紫色物） T淋巴细胞增殖试验 T淋巴细胞增殖试验 根据形态结构，计算淋巴细胞转 化率，即淋巴母细胞的含量 形态学方法 淋巴细胞转化过程中，细胞DNA合成大 量增多。在细胞培养液中加入氚标记的胸 腺嘧啶核苷（ 3H-TdR ），使3H-TdR渗 入到DNA中，根据细胞内核素的量可判断 淋巴细胞转化程度。 3H-TdR掺入法 MTT比色法 MTT是一种黄色可溶性噻唑盐，掺入细 胞后，在细胞活化增殖时通过线粒体能量 代谢过程，MTT代谢形成蓝紫色甲瓒沉积 于细胞内或细胞周围，形成的甲瓒的量与 细胞活化增殖的程度成正相关。 细胞毒试验 细胞毒试验 乳酸脱氢酶法 细胞凋亡检查法 乳酸脱氢酶法—LDH在胞浆内含量丰 富，正常时不能通过细胞膜，当细胞受 损伤或死亡时可释放到细胞外，此时细 胞培养液中LDH活性与细胞死亡的数目 成正比，用比色法测定。 乳酸脱氢酶法 细胞凋亡检查法—靶细胞被CTL 杀伤后，可发生细胞凋亡。方法有形 态学法、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞 仪等。 细胞凋亡检查法 B细胞功能测定 B细胞的数目和功能测定是反应机体体液 免疫水平的重要指标。 抗体形成细胞试验 用绵羊红细胞（SRBC）免疫家兔或小鼠，取 家兔淋巴结或小鼠脾脏制成细胞悬液，与高浓度 的SRBC混合后加入琼脂糖凝胶中，其中每个释 放溶血性抗体的细胞可致敏其周围的SRBC ，在 补体参与下，抗体形成细胞周围SRBC溶解，在 其周围形成一个肉眼可见的空斑。一个空斑代表 一个抗体形成细胞，空斑数量反应机体的体液免 疫功能。 举 例 增强免疫力的功能性食品的研究 1.乳果糖低聚体促进肠粘膜IgA的分泌 2.具有促进IgA产生的食用蘑菇的探索 3.LF、b-LG增强淋巴细胞产生抗体 4.Lf促进IL4的产生 5. b-LG促进IFN的产生 6.大豆胰蛋白酶抑制剂增强脾淋巴细胞产生IgM 7.调节肠Caco-2细胞产生IL-8的食品成分的研究 结果；薄荷抽提物具有促进IL-8分泌的作用。 降低过敏性的食品研究 1.具有抗过敏性的乳酸菌株的选拔 2.具有抗过敏性的甜茶成分的分析 3.降低卵白蛋白刺激引起的IgE抗体水平的乳酸菌株的研究 4.降低b-LG免疫xing deyanjiu 1，抗原抗体之间空间结构的互补程度不同，结合强弱也不同 2，抗原抗体反应一般在pH6-8，pH过高或过低都将影响抗原与抗体的理化性质，例如当ph接近等电点时，会引起非特异性的凝集。 3，常用温度在37度。在一定范围内，温度升高加速分子运动，抗原与抗体碰撞机会增多，使反应加速。但若温度高于56度，可导致已经结合的抗原抗体在解离，甚至变性或破坏。 4，一定电解质、离子强度：适当电解质是抗原抗体出现可见反应的条件。 免疫标记技术immunolabelling technique 指用荧光素，放射性核素