菜豆象检疫检测与鉴定方法报批稿.DOCVIP

前 言 本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：全国农业技术推广服务中心、广东省植物保护总站、华南农业大学。 本标准主要起草人：冯晓东、王琳、朱景全、陆永跃、李梅辉、刘慧、李小妮、曾玲、王玉玺。 菜豆象检疫检测与鉴定方法 1 范 围 本标准规定了菜豆象Acanthoscelides obtectus (Say)的检疫检测与鉴定方法。 本标准适用于豆类生产及储存、调运过程中，对菜豆象的检疫检测与鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 15569 农业植物调运检疫规程 3 原理 3.1 分类地位 菜豆象属鞘翅目（Coleoptera），豆象科（Bruchidae）。 3.2 检测原理 菜豆象主要借助被侵染的豆粒进行传播。菜豆象形态特征见附录B、附录C和附录D，分布、寄主范围和为害特征见附录E。 4 仪器、用具及试剂 4.1 仪器、用具 仪器：生物显微镜、体视显微镜、测微尺、培养箱、农用软X光机、照相机等。 用具：玻璃瓶、白瓷盘、培养皿、镊子、小烧杯、酒精灯、微型解剖刀、解剖针、载玻片、盖玻片、吸管、吸水纸、滤纸、脱脂棉、纱布、指形管、小毛笔、记号笔、标签、各类孔径样品筛。 4.2 试剂 食盐或硝酸铵、0.5%氢氧化钠（NaOH）、1%碘化钾（KI）、2%碘酒、70%乙醇、无水酒精、10%氢氧化钾（KOH）溶液或10%氢氧化钠（NaOH）溶液、酸性品红染色剂、植物油或机油。 5 检测 5.1 产地检测 5.1. 1 检测范围 菜豆象寄主植物。 5.1.2 检测时期 日均气温在15℃以上，豆类作物成熟中后期。 5.1.3 取样方法 在待检测地块内，随机选取30个样点，对每个样点进行5次扫网，每次扫网面积约为0.25m2，每个样为采自3个样点扫网所获昆虫样本。 如需采集幼虫进行鉴定时，采用随机取样检查法，样点数量不少于30个点，每个点的面积为0.25m2，每个样为采自3个样点整株豆荚中的500g左右豆类。 5.2 调运检测 5.2.1 检测范围 豆类产品及其盛装、贮藏、运输的器具，豆类货物的堆放处。 5.2.2 检测时期 豆类在仓库内储存或者调运期间，可常年检测。 5.2.3 取样方法 仔细检查货物包装物外表、铺垫材料、车、船、集装箱的四壁、包装袋的边、角、缝隙等处，查看是否有疑似菜豆象成虫或受害豆粒、蜕、排泄物等，如有则取成虫及受害豆粒。 抽取样品按GB l5569的相关规定进行。 5.3 取样结果及记录 将取样获得的豆类置于样品采集袋内，将收集的疑似菜豆象成虫、幼虫、蛹、卵及蜕等保存于相关容器中，注明采集时间、采集地点、采集人、寄主后，送实验室进一步培养、检测鉴定。 抽样记录于附录A.1。 6 检查方法 根据实际工作条件，选择以下1种或1种以上方法，检查上述所抽样品是否有危害状或疑似菜豆象，并收集各虫态标本。 6.1 肉眼检查 检查豆荚内腹线上是否有狭缝或小孔，狭缝或小孔内是否有卵。剥开豆荚检查是否有幼虫，仔细检查豆粒上是否有虫卵、豆粒上有无幼虫蛀入孔、有无“小窗”或羽化孔，查看有无幼虫、蛹或成虫。 6.2 过筛检查 用黑色作衬底，将检验样品放入4mm圆孔样品筛内回旋过筛，观察筛下物。首先检查筛下物内有无成虫、卵和幼虫，然后用毛刷将筛下物扫入培养皿内，带回实验室内镜检。 6.3 饲养检查 将5.3中抽样获得的豆类样品，放入25℃～30℃、相对湿度50%～70%的培养箱内饲养观察，逐日观察是否有成虫出现。 6.4 染色检验 白色或近白色的豆粒样品，用酸性品红染色法将虫蛀孔染成红色，被害豆粒种皮下如呈现羽化孔，可进一步检查豆粒内是否有老熟幼虫和蛹。染色检查过程可在以下两种方法中选择一种进行：（1）50g样品→样品筛或纱布→1%KI或2%碘酒（2min）→0.5%NaOH（0.5min～1min）→水洗（0.5min）→挑出表面有褐色到深褐色点的豆粒→镜检；（2）50g样品→样品筛→30℃水（1min）→酸性品红（2min）→水洗（0.5min）→挑出表面有粉红色小点的豆粒→镜检。 褐色、红色或其他深色豆粒样品，不必进行染色检验。 6.5 油脂检验 取过筛检验完的样品500g～1000g，分成每50g一组，放在浅盘内铺成一薄层，按1g豆粒用植物油或机油1mL～1.5mL的比例，将油倒入豆粒内均匀浸润，0.5h后检查。被油脂浸润的豆粒变成琥珀色，幼虫侵害处呈一小点，虫孔处种皮呈现透明斑。再将有上述症状的豆粒挑出，带回实验室内镜检。 此法对白皮、