实验3 血液生理.ppt

实验三 血液生理 红细胞比容、血沉及血红蛋白含量的测定 红细胞、白细胞计数 基本内容 红细胞比容测定 血沉的测定 血红蛋白含量的测定 红细胞、白细胞计数 一.红细胞比容的测定 实验目的：学习测定红细胞比容的方法 将抗凝血放在特制有刻度的玻璃管(温氏分血管)中，经过离心沉淀，使血细胞与血浆分离。红细胞下沉，彼此压紧而又不改变每个血细胞的正常形态。根据玻璃管刻度的读数，测出红细胞占全血的容积百分比即红细胞比容。此时管中的血液分为三层：上层为淡黄色的透明液体即血浆；中层为很薄的一层呈灰白色的白细胞和血小板；下层为挤压很紧的暗红色的红细胞。 方法与步骤 1.草酸盐抗凝剂的配制：草酸钾0.8克，草酸铵1.2克，再加蒸馏水至100毫升。每1毫升血液可用0.1毫升上述溶液。吸取混合草酸盐抗凝剂溶液，置于小试管内，并使该抗凝剂均匀分布于小试管内壁上，60－80℃烘箱内烘干备用。 2. 采血：将血液缓缓注射于有抗凝剂的试管中，用拇指堵住管口，倒转试管两、三次，使血液与抗凝剂混合。 3.离心：用长颈滴管吸取试管内的抗凝血，将滴管插入温氏分管的底部，沿管壁将抗凝血准确加到分血管刻度10厘米处。注意不要有气泡。将温氏分血管配平后放入离心机中，3000转/分钟离心30分钟。 4.读数： 讨论影响比容测定的因素 二.血沉的测定 目的：学习测定红细胞沉降率的方法，了解测定其数值的意义。 原 理 红细胞沉降率（血沉）是指血沉管内的抗凝血被静置一段时间（1h）后，红细胞因重力而下沉的毫米数。它是以血浆层的高度来计算的，血浆层越高，则血沉越快。家畜有的疾病可以引起红细胞血沉的显著加速，故测定红细胞血沉具有临床诊断价值。 方法与步骤 1.采血：5%的柠檬酸钠作为抗凝剂，抗凝剂与血液之间的容积比例为1：4。 2.血沉管（清洁干燥）：吸血前要混匀抗凝血，加入血沉管的血不能带有气泡，血沉管垂直放置于血沉管架上。 3.检查：１５分钟，３０分钟，１小时和２小时检查血沉管上部血浆的高度。 讨论：影响血沉的因素 三.血红蛋白含量的测定 目的：了解和掌握比色法测定家兔血 红蛋白的含量 原理： 在一定量的血液中加入少许盐酸，酸不仅破坏红细胞膜，且将红细胞内的亚铁血红素转变成高铁血红素，后者呈较稳定的棕色。将其用蒸馏水稀释后与血红蛋白计的标准比色板进行目测比色，即得每100ml血液所含的血红蛋白的克数。 方法与步骤： 1.滴加0.1mol/L盐酸溶液至测定管刻度“2”或“10%”处。 2.采血与滴加血液：用吸血管吸血至刻度20立方毫米处；不能有气泡，反复吹洗几次。玻棒将血液和盐酸混匀，放置１０分钟。 3.滴加蒸馏水：逐滴滴加，然后摇匀，观察颜色，直至比色箱中液体颜色与标准比色板的颜色相同为止。 注意事项： 血液与盐酸作用时间： 蒸馏水逐滴滴加 做三次，取平均值 及时清洗吸血管：吸取蒸馏水冲洗几次，吸取酒精冲洗几次。 实验要求： 记录血红蛋白含量并讨论该含量的实际意义。 四、红细胞、白细胞记数 实验目的：了解红细胞、白细胞计数的原理， 学习人工计数红、白细胞的方法。 实验原理：一定量的血液稀释后，置于血细胞计数室内，计算一定体积内的血细胞数，然后再换算成每mm3或１Ｌ血液中的血细胞数。 方法与步骤 １．血细胞计数板的准备：计数室只能用自来水和蒸馏水冲洗，然后以丝巾轻轻擦干，切不可用酒精和乙醚洗涤。洗涤完毕后，放入低倍显微镜下观察其构造。 血球记数板构造：两个计数室，每室分为9个大格。格与盖玻片的距离为0.1mm，每大格边长为1mm，面积为1mm2，体积为0.1mm3。四角的4个大方格分为16个中方格，用作白细胞计数。中央大方格被分为25个中方格，每个中方格边长为0.2mm，面积为0.04 mm2，体积为0.004mm3。每个中方格又分为16个小方格，中央大方格四角的中方格和中央的中方格用作红细胞计数。 ２．采血及稀释： （1）配制稀释液：用移液管吸取1.99ml红细胞稀释液（生理盐水）放入1号试管，用移液管吸取0.38ml白细胞稀释液（2%醋酸加少量龙胆紫）放入2号试管。 （2）采血：用吸血管吸取血液10μl放入1试管，用吸血管吸取血液20μl放入2号试管，摇匀试管，使血液与稀释液充分混匀。 ３．计数：盖玻片放好后，滴半滴于计数室与盖玻片交界处，稀释血液可自动均匀渗入计数室。放置1-2分钟，待细胞下沉后进行计数。 记数原则 1. 计数红细胞：将计数室中央的大方格置于视野内，转用10倍物镜下计数5个中方格（四角和中央）内的红细胞总数。计数时必须遵循一定方向逐格进行，如将上侧和左侧线上的红细胞数入，则勿将下侧和右侧线上的数入。 2.计数白细胞：10倍物镜下计数四角四个大方格中所有