实验一 培养基的配制和灭菌食品.ppt

1 、牛肉膏蛋白胨培养基配方（见实验课本24页1） 2 、葡萄糖发酵培养基配方（见实验课本244页） 3 、乳糖发酵培养基配方（见实验课本244页） 4、 明胶培养基配方（见实验课本243页） 5 、淀粉培养基配方（见实验课本243页） 四、实验内容 （一）、培养基的配制： 先将试管贴好标签。注明培养基名称，日期。标签粘贴位置在离管口1/3管身处。 注意：标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹 操作图示： 四、实验内容 高压蒸汽灭菌法其步骤如下： 1. 灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。2. 接通电源，进行加热3. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。4. 当压力达1.05kg/cm2时，此时灭菌器内的温度为121℃，维持30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降低压力，延长时间。5. 灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品 实验八大分子物质的水解和糖发酵试验 * * 实 验 培养基的制备和灭菌 一、目的要求 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。 了解几种灭菌方法，重点掌握高压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。 二、基本原理 培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的营养基质。其中含有碳源、氮源、无机盐、生长因子以及水分等。微生物在培养基上生长繁殖还必须在最适酸碱度范围内才能表现它们最大生命力，因此不同种类的微生物应将培养基调到一定pH值范围。培养基种类很多，不同的微生物所需培养基不同。按其组成可分合成培养基和天然培养基。按其物理状态可分固体培养基，液体培养基和半固体培养基。按其特殊用途可分加富培养基，选择培养基、鉴别培养基。 培养基配制后还必须进行灭菌。灭菌和消毒是二个不同含义的名词。消毒是指消灭病原菌或有害微生物，而灭菌则是杀死或消灭一定环境中的所有微生物。 消毒与灭菌的方法很多，但总的可分为物理法与化学法两大类。物理法包括加热灭菌（干热灭菌与湿热灭菌），过滤灭菌、紫外线灭菌等。化学方法主要是利用有机或无机的化学药品对实验室用具和其它物体表面进行灭菌与消毒。 三、实验分组与任务 整个班分8个组，一排为一组，每组6人 第1-2组：配制250ml淀粉培养基。用2-3个三角瓶装好,同时要包装并灭菌培养皿,用于下次接种前倒平板. 第3组：配制400ml葡萄糖发酵培养基，分装成约35支试管，每支试管装液量为试管高度的四分之一 第4组： 配制400ml乳糖发酵培养基，分装成35支试管，每支试管装液量为试管高度的四分之一 第5-6组： 配制200ml明胶培养基，分装成15支试管，每支试管装液量为试管高度的四分之一 第7-8组：配制200ml牛肉膏蛋白胨培养基,分装到三角瓶中,同时要包装并灭菌培养皿,用于下次接种前倒平板. 四、各培养基的配方 3．注意事项： 在配制培养基时一定要注意调溶液的pH。 称药品时严防药品混杂，一把药匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再取另一种药品。瓶盖也不要盖错。 在烧杯融化琼脂的过程中，人要在电炉旁看着，以免培养基因沸腾而溢出烧杯。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦。注意带上棉纱手套防止烫伤。 分装过程中，注意不要使培养基沾在管口上，以免沾污棉塞而引起污染。 四、实验内容 （二）培养基灭菌 培养基分装好后，塞上棉塞，外面再包一牛皮纸，便可灭菌。灭菌的时间和温度按各培养基规定进行，以保证灭菌效果和不损坏培养基的必要成分。培养基经灭菌后，可放在37恒温箱培养24小时，无菌者方可使用。 在实验室里用得最多的加热灭菌法是高压蒸汽灭菌和干热灭菌。一般培养基和灭菌水等用高压蒸汽灭菌，而玻璃器皿常用干热灭菌。蒸汽灭菌为105-121℃，15-20分钟，干热灭菌为160-170℃，1-2小时。目的都是使细菌体内蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 ???? 在同一温度下，湿热杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固，同时湿热穿透力强，而且当蒸汽与被灭菌物体接触凝成水分时，又可放出热量，使温度迅速增高，从而增加灭菌效力。 四、实验内容 五、实验报告 思考题： 在培养基配制操作过程中应注意什么问题?为什么? 培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是无菌的? 高压蒸汽灭菌前为什么要将灭菌锅内的冷空气排尽? 一、目的与要求 证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系。 掌握微生物大分子水解试验的原理和方法。 了解糖