慢性阻塞性肺疾病患者支气管肺泡灌洗液细菌宏基因组DNA的制备.pdfVIP

Ｒesearch Paper 研究报告 微生物学报 A cta M icrobiolog ica Sinica 54 (8) :943 － 949 ; 4 August 20 14 ISSN 000 1 － 6209 ; CN 11 － 1995 / Q http :/ / journals． im ． ac ． cn / actamicrocn doi : 10. 13343 / j ． cnki． wsxb ． 20 14 . 08. 0 13 慢性 阻塞性肺疾 病 患者 支气 管肺泡灌洗液细 菌宏 基因 组 DNA 的制备 1 ，3 ， 1 ，3 ， 1 ，3 ，John Ｒ Erb-downward2 ，3 ，Gary B Huffnagle2 ，3 ，Margaret 王娟 沈 宁 杜 毅 鹏 Ｒ Gyetko2 ，3 ， 1 ，3 * 贺蓓 1 ， 100 19 1 北 京大学第 三 医 院呼吸科 北 京 2 ， 密 西根 大学 医学院 内科 呼吸与危 重症 医学科 美 国 3 - ， 100 19 1 北 京大学 医学部 密 歇 根 大学 医学院转 化 医学与 临床 研究 联 合研究所 北 京 : 【 】 (chronic obstructive pulmonary diseases ，COPD ) 摘要 目的 优 化稳 定期慢 性 阻塞性 肺 疾 病 患者 支 气 管肺 泡 (bronchoalveolar lavage fluids ，BALF ) DNA ， 灌洗 液 细 菌 宏 基 因组 的提 取 方 法 以便 于 高 效 提 取 微 量 的细 菌 DNA PCＲ 。 【 】 COPD BALF 5 mL ， 。 进 行 后续 的 反应和 测序 方法 取稳 定期 患者 的 离心 收集 细胞 为了有 效提 ， QIAGEN DNA : 取样 品 中革 兰 氏阳性菌 的 基 因组 对 的 提 取 试 剂 盒 的操 作 步 骤 进 行 优 化 加 入 裂 解 缓 冲 液 ATL ， K ， AL 后 首先运 用研 磨珠 和 多功 能生物样 品匀质 器破碎 菌壁 再 加 入 蛋白酶 孵 育 然 后 加 入 裂 解 缓 冲 液 。 DNA ， ， AW 1 AW2 ， 50 L 振荡 混匀 无 水 乙醇沉 淀 后 将 全 部溶 液过 柱 用洗