RNA干扰技术在农作物害虫防治中应用.docVIP

RNA干扰技术在农作物害虫防治中应用 　　摘 要：RNA干扰（RNAi）技术作为基因沉默的工具，已被广泛应用于农作物害虫防治研究。准确选择靶基因、将dsRNA或siRNA导入昆虫体内、siRNA在昆虫体内的扩增和扩散是RNAi技术应用于农作物害虫防治的基础。应用RNAi技术能有效地保护农作物抵抗害虫危害，在农作物遗传改良进行精准抗虫方面具有重大的应用前景。 关键词：RNA干扰，农作物，害虫防治 中图分类号：S435 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2012）12-0016-04 Application of RNAi Technique in Pest Management for Crop Guo Qiang， Fan ZhongXue*， Chu Dong， Li XiaoQing （High-Tech Research Center， Shandong Academy of Agricultural Sciences/Shandong Provincial Key Laboratory of Crop Genetic Improvement and Ecology and Physiology， Jinan 250100， China） Abstract RNA interference （RNAi） technique as a tool for gene silencing has been widely used in agriculture for the management of insect pests. Accurately selecting target genes， transferring dsRNA or siRNA into insects and amplifying and spreading the siRNA within the insects are the base for the application of RNAi on pest management. The application of RNAi technique could effectively protect crops from insect pests， and it has better prospect in accurate management of agricultural pests. Key words RNAi； Crop； Pest management RNA干扰（RNA interference，RNAi）是由与靶基因序列同源的双链RNA（dsRNA）介导的特异性基因表达沉默现象，是生物的一种古老并且进化上高度保守的基因表达调节机制。它在真核生物中参与抵抗病毒入侵、抑制转座子活动、调控基因的表达[1]，具有重要生物学意义。RNAi技术作为基因沉默的工具，已被广泛应用于基因功能研究、基因治疗和病毒防治等方面，也为农作物害虫防治提供了新的策略，已成为生物技术领域的一个热点。1 RNAi技术应用于农作物害虫防治的基础 11 选择靶基因 利用RNAi技术保护农作物抵抗害虫的可行性已被证实，2007年发表在Nature Biotechnology中的两篇文章表明利用RNAi技术可以防治害虫[2，3]。这种方法成功的关键是：选择一个合适的靶基因，并在农作物中表达足够量的能被害虫摄取的dsRNA/siRNA。尽管针对的农作物和害虫都不同，但仔细选择靶基因是共同的。 12 害虫RNAi的导入方法 RNAi常用的导入方法有注射、饲喂、浸泡、组织培养、病毒感染、转基因等，但在昆虫中主要用注射、饲喂和浸泡法进行RNAi研究。 在绝大多数昆虫RNAi研究中，首选的输入方法是将体外合成的微量的dsRNA/siRNA显微注射到昆虫体腔内。目前已在鳞翅目的烟草天蛾（Manduca sexta）[4，5]、斜纹夜蛾（Spodoptera litura）[6]和棉铃虫（Helicoverpa armigera）[7]等昆虫建立了通过注射dsRNA/siRNA诱导RNAi的体系。但是注射法具有以下缺点：注射压力和伤口不可避免地影响到昆虫，如损伤表皮激发了免疫反应；显微注射是一项较难掌握的技术。个体较大的昆虫在注射后，伤口易愈合，成活率较高，而个体很小的昆虫，在注射难度加大的同时，成活率也相对较低。由于显微注射的局限性，此法较难用于大规模分析。 通过喂食诱导RNAi在绝大多数情况下可能是最诱人的方法，这是因为操作简单方便，容易实现，对昆虫造成的危害性小，不影响其他基因的表达。通过饲喂表达dsRNA/siRNA的作物、人工