CNTF基因多态性及中国越野滑雪运动员运动能力相关性研究.doc

CNTF基因多态性及中国越野滑雪运动员运动能力相关性研究摘要：探讨中国越野滑雪运动员运动能力与CNTF基因多态性的关联性，为越野滑雪运动员的基因选材提供前期探讨性的理论依据与基础数据。方法：采用PCR-RFLP方法测定30名越野滑雪运动员与30名普通大学生的基因的多态性。结果：对照组等位基因频率为A=10.17％，G=88.13％，基因型频率为A/A=0％，A/G=20.69％，G/G=79.31％，越野滑雪运动员等位基因频率为A=20％，G=80％，基因型频率为A/A=6.67％，A/G=26.67％，G/G=66.67％。经卡方检验不符合HardY-Weinberg遗传平衡定律，且CNTF基因型分布和等位基因与对照组的基因型频率和等位基因频率无统计学意义(P0，05)结论：CNTF基因的多态性与中国黑龙江省越野滑运动员运动能力无相关性。 关键词：基因多态性：运动能力：选材 中图分类号：G804.23　文献标识码：A　文章编号：1008-2808(2012)04-0118-04 随着科学技术的高速发展，分子生物学尤其是基因选材的研究日趋深入。近年来，此方面已成为选材的研究热点，也取得了令人鼓舞的成果。研究表明机体的某些运动能力(力量、耐力、速度等)具有相当高的遗传度。睫状神经营养因子(Ciliary neurotrophicfactor，CNTF)是体内具有多种生物学功能的细胞因子，能够促进运动、感觉等神经元的存活，防止神经损伤对副交感神经有营养作用，对感觉神经元和交感神经也有一定的作用。研究发现骨骼肌中存在着大量的CNTF的受体，它不仅对神经细胞起作用，而且对骨骼肌的生长及功能也起到营养作用。CNTF基因的多态性与运动能力有较大的关系，GA基因型携带者的肌肉力量与爆发力显著高于GG和AA基因型携带者，提示CNTF基因的多态性与人体肌肉力量有关联，但由于此方面研究较少，大多从综述的角度加以总结，缺乏大量的实验研究和结果，需深入系统地研究。优秀运动员选材是体育科研界一项重要的工作，不但可以帮助教练员尽早发现，挖掘具有特殊竞技能力的人才，而且可节省大量的人力、物力和财力。我国越野滑雪运动虽起步较晚，但已有向世界比赛牌冲击的潜力。越野滑雪运动作为体能主导类项目，运动员的力量和耐力素质对运动成绩起着决定性作用。研究力量相关基因CNTF的多态性与越野滑雪运动的关联必将为此项目的选材提供实验的数据。 1实验对象与方法 1.1实验对象 实验组：中国黑龙江越野滑雪队队员30名，运动等级一名国际健将，9名国家级健将、其余为国家一、二级运动员。训练年限平均5.75年。年龄17～24岁。对照组：选择哈尔滨体育学院运动人体科学专业的本科学生30名作为实验对象，年龄在18～22岁；未经任何专业训练。测试人员全部为北方汉族，测试时身体健康。 1.2实验内容 采用PCR-RFLP方法对越野滑雪运动员和普通大学生CNTF基因多态性的频率分布分析，CNTF基因A/G多态性的分布特征。 1.3实验仪器 PCR扩增仪(德国eppend 22331)；北京水平板电泳仪(DYYlll3)上海复日紫外与可见光分析装置、成像系统及其软件(FR-200)。 1.4CNTF基因A/G多态性测定过程 1.4.1取静脉血5ml，加入2％EDTA混合抗凝，由白细胞制备模板DNA，promega公司全血总DNA提取专用试剂盒提取。 1.4.2引物的选择、合成、扩增及质控 根据Takahashi等报道的碱基序列，参考Thome等报道的引物序列由华大公司进行合成，常规处理保存。 引物序列：S5-CTG GAG ACC ACT CCCATCCTTTCT-3 AS5-CAG GTT GAT GTT CTT GTT CAT GCCC-3 1.4.3扩增体系：25μL反应体系：10×Taq buffer5μL dNTP 0.5μL，上下游引物各2μL(10pmol)，Taq酶0.125U1，模板DNA 2L，以灭菌双蒸水补足体积。反应条件：预变性95℃5 min，变性94℃ 30s，退火60℃20s，延伸72℃10s，35个循环，终末延伸72℃7min。扩增产物以3％琼脂糖凝胶电泳40min。(以上试剂由promega公司提供) 1.4.4酶切 酶切体系：20μl,HaeⅢ限制性内切酶0.5μl，BSA0.2μl，扩增产物17.3μl，buffer 2μl。反应条件：37℃水浴，2.5h。(以上试剂由promega公司提供) 1.4.5电泳 酶切产物在含有0.5μg/ml EB的3％的琼脂糖凝胶电泳，以DNA Marker DL2,000为片段长度标志，电压100V，电泳30min。凝胶成相仪监测结果并留取照片