复方中药对免疫抑制小鼠免疫促进作用探究.doc

复方中药对免疫抑制小鼠免疫促进作用探究 　　[摘要] 目的 从细胞及分子水平，探求中药复方对免疫功能增强的作用及效能，在扶正固本、活血益气的中药中遴选出有广阔应用前景的促进免疫的中药复方。 方法 50只昆明小鼠随机分成正常对照组、模型对照组与高剂量中药组、中剂量中药组、低剂量中药组。用环磷酰胺抑制小鼠免疫功能制作免疫抑制模型，观察用药后正常对照组、模型对照组与高剂量中药组、中剂量中药组、低剂量中药组血清IgG、补体C3，脾淋巴细胞表面抗原标志物CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+、CD49b+，脾淋巴细胞细胞因子IL-2和IFN-γ及体重和脾指数。 结果 与模型对照组相比，高剂量中药组、中剂量中药组、低剂量中药组体重和脾指数、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+差异无统计学意义（P 0.05），低剂量中药组血清IgG降低[（177.19±45.66）g/L]，CD49b+、补体C3及脾淋巴细胞细胞因子IL-2和IFN-γ升高[（32.43±6.31）%、（294.0±61.2）g/L、（38.44±7.82）%、（22.11±6.29）%]，差异均有统计学意义（均P 　　[Key words] Promotion of immunity； Compound Chinese medicine； Mice 免疫学是现代医学发展极为迅速的学科之一，疾病发生发展很多都与免疫功能有关，某些肿瘤患者在放疗、化疗后或一些病毒感染后致免疫性力低下，但临床增强免疫力有明显临床疗效的药物却不多见。祖国医学认为“正虚邪扰”，疾病与人体的抵抗力密切相关，并且临床处方运用扶正祛邪的法则治疗疾病，临床观察亦有疗效，许多学者研究了多种单味药对免疫功能的调节作用，尝试发现、提取、合成能调节免疫的化合物，本实验旨在从细胞及分子水平出发，探求中药复方对免疫功能增强的作用及效能，在扶正固本、活血益气的中药中遴选出有广阔应用前景的促进免疫的中药复方。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 中药的制备 复方中药（由西洋参、黄芪、枸杞、当归等多味药）组成，按总量400 g（西洋参96 g、黄芪96 g、枸杞128 g、当归80 g）称取处方各药（由江西省人民医院药剂科供应），加蒸馏水400 mL，浸泡24 h，隔水煮1 h，滤过药液，药渣再加蒸馏水适量，煮1 h，滤出药液，合并两次药液，隔水浓缩至400 mL，即每1 mL相当于1 g生药的原液，灭菌封存备用。 1.1.2 实验动物 6周龄昆明小鼠50只，体重（20±2）g，雌雄各半，均购自江西中医学院。动物自由饮食、饮水，动物质量合格证号：JIDW NO.2012-0041。试验过程中对动物的处置符合2006年科技部关于对试验动物的有关规定[1]。 1.1.3 试剂与仪器 免疫抑制剂环磷酰胺（江苏恒瑞医药股份有限公司，批号，为200 mg/支的粉针剂；小鼠IgG和补体C3的ELISA检测试剂盒为西唐生物公司进口分装产品（批号分别为：1208061、1208201）；Anti-MouseCD3（PE-Cy5）、Anti-MouseCD4（FITC）、Anti-Mouse CD8（PE）、Anti-Mouse CD19（PE）、Anti-MouseCD49（FITC）、Anti-MouseIL-2（PE）、Anti-MouseIFN-γ（FITC）荧光抗体（购于eBioscience Inc.San Diego，CA公司，批号分别为E06065-1630、E00077-1630、E01036-1633、E01047-1630、E00752-1630、E02060-1630、E00862-1631）；BECKMAN COULTER流式细胞仪；酶标仪（550型）；倒置显微镜（Leica）；光学显微镜（OLYM-PUS）；红细胞裂解液（实验室制自备）；PBS缓冲液（实验室制自备）；16号小鼠灌胃针；Allegra 64R低速冷冻离心机（BECKMAN COULTER，rmax=204 mm）；HC电子天平（0.1 g）、sarrorious电子天平（0.001 g），300目金属筛网。 1.2 方法 1.2.1 药物急性毒理试验 该复方中药各组份临床应用广泛，未见明显毒副作用，因此用小鼠灌胃最大容量0.4 mL/10 g[2]来检查药物的LD50，取20只小鼠，每次灌胃复方中药0.8 mL，2次/d，观察15 d，无一死亡，可见LD50 0.4 mL/10 g。 1.2.2 实验分组 应用随机数字表法进行随机将动物分为5组：正常对照组、模型对照组、低剂量中药