药用植物细胞悬浮培养研究报告进展.docVIP

药用植物细胞悬浮培养的研究进展 [摘要] 我国是世界上使用和出口中药材资源最多的国家，土地资源有限的我国不能只寄希望于大田栽培手段来提供中药材及其活性成分，大力发展生物技术来解决中药材的资源问题对我国具有特殊而且重要的意义。利用植物细胞培养技术是名贵药物资源可持续发展的一条重要途径。该文综述了药用植物细胞培养条件的优化，次生代谢途径的调控以及细胞反应器培养的实例，但要使更多药用植物真正实现商业化生产仍需要多方面的努力。 [关键词] 药用植物；细胞；诱导子；反应器 [稿件编号] 20121010001 [基金项目] 国家科技支撑计划项目（2012bai29b02）；天津市科技支撑计划重点项目（09zckfsh01100） [通信作者] *高文远，tel/fax：（022e-mail： pharmgao@ [作者简介] 王娟，博士，讲师，研究方向中药生物工程，e-mail： drwangjuan@163.com 植物细胞组织培养的研究开始于1902年，haberlandt在schwann和schleiden创立的细胞学基础上，提出了细胞全能性的观点。1934年，white首次成功地进行了植物细胞的体外培养。1939年，white和gautheret首次用实验方法建立了植物组织和器官的人工无菌培养技术。1940—1976年，科学家们开展了大量的工作进行培养基的筛选和培养方法的探索，使植物细胞和组织培养技术发展成一门精细的实验科学，在选材消毒、接种培养、诱导筛选、继代保存、分离鉴定等方面已经建立了一套标准的操作程序。1956年，第一个应用细胞培养技术生产天然产物的专利诞生了。到目前为止，通过药用植物细胞培养研究过的药用植物超过400种，从培养细胞中分离到的次级代谢产品在600种以上，其中60多种药用植物代谢物含量超过或等于原植物的含量。 药用植物细胞培养研究的大部分内容是通过高产组织或细胞系的筛选与培养条件的优化等，以期降低成本及提高次生代谢产物的产量，或者通过对次生代谢产物生物合成途径的调控来达到相同的目的[1]。同时，许多科学家向药用植物工业化培养方面进行了不懈的努力。 1 药用植物细胞悬浮培养条件的优化 1.1 药用植物悬浮细胞培养中物理因素的优化 对于药用植物悬浮细胞培养来说，环境中的许多物理因素对细胞的生长、目标次生代谢产物的合成具有很大的影响。如温度、光照、ph、电场、磁场、电磁辐射、机械力以及超声波等在药用植物悬浮细胞培养过程都有着十分重要的作用。 在药用植物组织培养中，通常培养温度控制在20～28 ℃，最适温度为（25±2） ℃[2]，但不同植物的最适温度不同，且植物细胞生长和次生代谢产物的合成所需的温度很多时候并不一致，因此选择合理的培养温度并进行相应的调控对于细胞生长以及产物合成十分关键。hoopen等[3]曾对长春花catharanthus roseus细胞的培养过程，takeda等[4]对草莓细胞的培养过程分别进行温度的阶段性调控，结果都在很大程度上提高了产物的产率。 药用植物的组织培养都要求一定的ph。通常一般培养基ph都在5.6～6.0。如果ph不适则直接影响药用植物外植体对营养物质的吸收，进而影响外植体的脱分化、增殖、器官形成以及细胞中次生代谢产物的含量。不同ph对不同植物的影响会有差异。malik等[5]研究不同ph对新疆紫草悬浮培养细胞生长及紫草宁衍生物合成的影响发现，适合紫草细胞生长及紫草宁衍生物形成的ph在7.25～9.50。另外，值得注意的是，与培养温度相似，细胞生长繁殖与次生代谢产物合成时所需的ph可能并不一致，需要在不同的阶段控制不同的ph。 目前，关于电场对药用植物悬浮细胞培养的作用机制主要是膜周电泳学说，该学说认为对细胞施加稳定的电场能够导致膜中带电物质的重新分配，最终导致原生质体生长和分化效应。石贵玉等[6]曾对银杏悬浮培养细胞施加一定的高压电场进行刺激，结果发现对细胞的相关指标产生了较大的影响；而磁场的作用机制使它加速了细胞内的氧化磷酸化过程，从而促进atp的合成，最终使得有丝分裂指数增高。 王曼丝等[7]和洪丽萍等[8]分别研究过磁场对滇紫草细胞培养过程的影响；有研究[9]表明宇宙中的电磁波对生物体都会产生巨大的影响；超声波的运用主要是有利于细胞次生代谢物向细胞外释放。 目前在这些方面的一些研究主要还是停留在机制的探讨上，而如何在细胞大量培养时综合利用并对这些因素进行调控还有待进一步的研究。 1.2 药用植物悬浮细胞培养中化学因素的优化 药用植物悬浮细胞培养过程中的一些化学因素如培养基组成、溶氧等都对细胞的生长有着非常重要的影响。培养基中的碳源、氮源及一些微量的金属离子不仅是植物细胞生长以及营养物质合成的物质基础，而且很多都能促进细胞生长或者促进产物的合成。