水质粪大肠菌群的测定酶底物法编制说明.doc

《水质的测定法》 编制说明 《水质的测定法》 标准编制组 201年月  1项目背景 - 1 - 1.1任务来源 - 1 - 1.2工作过程 - 1 - 2标准制订的必要性 - 1 - 2.1粪大肠菌群的环境危害 - 2 - 2.2相关环保标准和环保工作的需要 - 2 - 3国内外相关分析方法研究现状 - 5 - 3.1 主要国家及国际组织相关分析方法研究 - 5 - 4标准制订的基本原则和技术路线 - 7 - 4.1标准制订的基本原则 - 7 - 4.2标准的适用范围和主要技术内容 - 7 - 4.3标准制订的技术路线 - 7 - 5方法研究报告 - 9 - 5.1主题内容与适用范围 - 9 - 5.2方法原理 - 9 - 5.3试剂和材料 - 9 - 5.4仪器和设备 - 10 - 5.5样品 - 10 - 5.6分析步骤 - 12 - 5.7结果计算与表示 - 22 - 5.8质量保证和质量控制 - 22 - 5.9废物处理 - 23 - 6参与方法验证单位及人员 - 23 - 6.1参加方法验证的实验室、验证人员的基本情况 - 23 - 6.2参加方法验证人员的基本情况 - 23 - 7对实施本标准的建议 - 24 - 参考文献： - 24 - 附　录　A （规范性附录） 51孔定量孔板MPN表（每100ml水样） - 25 - 附　录　B （规范性附录） 97孔定量孔板MPN表（每100ml水样） - 26 - 《水质的测定法》 编制说明 项目背景 任务来源 根据陕西省质量技术监督局陕质监标[201]第号文件《关于下达201年地方标准制修订项目计划的通知》精神，陕西省环境监测中心站编制组，开展《水质的测定法》标准制定工作，该项目编号为：SDBXM-2016。 工作过程 陕西省环境监测中心站在收到编制任务后，立即组织标准起草编制小组，制定标准编制计划。依据编制计划合理分工，深入论证工作，综合查阅国内外相关标准、文献，，在此基础上开展工作。期间，完成实验室内验证工作此基础，联合省内实验室开展方法的实验室间验证。通过对上述实验数据的合理分析，最终完成本标准（）的编制。 标准制订的必要性 大肠菌群在细菌分类学中，属于细菌当中变形菌门，γ-变形菌纲，肠杆菌目，肠杆菌科中埃希氏菌属、柠檬酸菌属、克雷伯氏菌属、肠杆菌属等一类细菌。它们不是某一种或者某一属细菌，而是与粪便污染密切相关的一组细菌。在卫生学用语中常用总大肠菌群和粪大肠菌群统称，总大肠菌群是指一类在37℃下24小时内发酵乳糖产酸产气、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。粪大肠菌群又称为耐热大肠菌群，是总大肠菌群的一部分，在44.5℃下能生长并发酵乳糖产酸产气，主要包括埃希氏菌属和耐热的克雷伯氏菌属细菌。 粪大肠菌群在自然界中分布广泛，主要来源于人和动物的粪便，因此在卫生学中可以指示粪便污染。由于在自然界中易死亡，粪大肠菌群的存在可以反映比较近期的粪便污染。水中粪大肠菌群含量的高低就可以直接反映水体粪便污染程度，进而指示肠道致病菌污染危害人体健康的风险。肠道致病菌主要包括沙门氏菌、志贺氏菌和致病性大肠埃希氏菌等，能够引起各种急慢性肠道感染、食物中毒、腹泻发烧等症状，还可引起泌尿道、呼吸道、伤口和中枢系统疾病。其中肠出血性大肠埃希氏菌O157:H7能引起人出血性腹泻和肠炎且并发溶血性尿毒综合症等。 2.2相关环保标准和环保工作的需要 多管发酵法自1989年列入《水和废水监测分析方法》（第三版）到2007年环保行业标准方法（HJ/T347-2007），已经应用了二十几年，但该方法存在着诸多缺点，例如： 检验周期长：初发酵和复发酵时间均需24 h，分析完一批样品最少需要2～3天时间； 操作较繁琐：每个样品均需要进行15管发酵，需要配制大量初发酵和复发酵培养基，同时对培养基进行分装和灭菌，以及使用大量玻璃器皿，如试管和玻璃小倒管的清洗等； 培养基差异性大：多管发酵法需要配制乳糖蛋白胨培养基，由于我国培养基原材料生产厂家缺乏准确的质控方法［12］，选择不同类别和来源的蛋白胨对不同大肠菌群的生长支持能力存在差异［3］。 对人员素质要求较高：需要具有微生 假阳性和假阴性：多管发酵法是通过大肠杆菌在培养过程中产酸改变培养液pH值，而使溶液中指示剂由“紫色”变“黄色”；同时产气使小倒管中产生“气泡”，从而进行定性分析。有研究表明初发酵24 h产气不明显，需延长到48 h才有利于观察，因此产生假阴性结果［］ 易染菌，数据重现性差：在进行多管发酵法实验过程中，培养基的灭菌，接种，复发酵转接等任何一个关键环节都可能出现染菌风险，因此整个实验过程需要严格的无菌操作技能。 滤膜法具有高度的再现性，不过在检验混浊度高、非大肠杆菌类细菌密度大的水样时，准确性差；且需要与多管发酵法进行可比性证实试验；但