水质粪大肠菌群的测定酶底物法征求意见稿.docVIP

ICS13.060.70 Z 16 DB61 陕西省地方标准 DB 61/ XXXXX—XXXX 水质 粪大肠菌群的测定 酶底物法 Water quality—Determination of fecal coliforms—Enzyme substrate method XXXX - XX - XX发布 XXXX - XX - XX实施 陕西省质量技术监督局发布 前言 本标准由陕西省环境监测中心站提出。 本标准由陕西省环境保护厅提出归口。 本标准起草单位：陕西省环境监测中心站。 本标准主要起草人：许锋、张会强、刘敏、周弛、吴卫东、马文鹏、张秦铭、张炜、宁西翠、宋文斌、丁义志、白慧莉。 本标准由陕西省环境监测中心站负责解释。 本标准的附录A、B、C均为规范性附录。 本标准为首次发布。 水质 粪大肠菌群的测定 酶底物法 范围 本标准规定了水中粪大肠菌群测定的酶底物法的方法原理、分析步骤、结果计算等要求。 本标准适用于地表水、水源水、生活污水和废水中粪大肠菌群的测定。 当接种量为300 ml时，本方法的检出限为3 MPN/L；当接种量≤100 ml时，检出限为10 MPN/L。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法 HJ/T 347-2007 水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法和滤膜法（试行） HJ 755-2015 水质 总大肠菌群和粪大肠菌群的测定 纸片快速法 GB/T 5750.12-2006 生活饮用水标准检验方法 微生物指标 HJ 493-2009 水质 样品的保存和管理技术规定 HJ 494-2009 水质 采样技术指导 术语和定义 酶底物法（enzyme substrate method） 粪大肠菌群（fecal coliforms）在选择性培养基上培养能产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase），该酶可以分解色源底物释放出显色基团，通过颜色变化进行定性，通过MPN法进行定量。 粪大肠菌群（fecal coliforms） 粪大肠菌群，又称耐热大肠菌群（thermotolerant coliforms）。是指在44.5 ℃下培养24 h，能产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）,分解选择性培养基中的邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG）生成黄色的邻硝基苯酚的肠杆菌科细菌。 最大可能数（most probable number,MPN） 最大可能数，是基于统计学理论间接估计水体中大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。根据一定体积不同稀释度的样品经培养后产生的目标细菌的阳性数，查统计学推算的MPN表，估算出一定体积样品中目标细菌的最大可能数。 方法原理 根据水样污染的程度，选择接种量为300 ml或接种量≤100 ml两种方式接种水样。将接种好的取样瓶、试管或经封口的51或97孔定量孔板置于恒温培养箱中44.5 ℃±0.5 ℃下培养24 h±2 h。当细菌生长繁殖时，粪大肠菌群能产生特定的β-半乳糖苷酶，选择性分解培养基中邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG）产生黄色的邻硝基苯酚（ONP）。当接种量为300 ml时，根据出现阳性的取样瓶数、试管数查MPN表（附表A）可得每升水样中粪大肠菌群数；当接种量≤100 ml时，根据51孔或97孔定量孔板的阳性孔格数查MPN表（附表B或C），再除以样品稀释度，计算水样中粪大肠菌群的浓度值。 试剂与材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。 培养基 选择市售商品化酶底物法试剂，或参照GB/T 5750.12-2006中规定的基本成分配制。每1000 ml培养基中所含基本成分见表1。 酶底物法培养基的基本成分 成分 分子式或缩写 含量 硫酸铵 （NH4）2SO4 5.0 g 硫酸锰 MnSO4 0.5 mg 硫酸锌 ZnSO4 0.5 mg 硫酸镁 MgSO4 100 mg 氯化钠 NaCl 10 g 氯化钙 CaCl2 50 mg 亚硫酸钠 Na2SO3 40 mg 两性霉素B Amphotericin B 1 mg 邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷 ONPG 500 mg 4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷 MUG 75 mg 茄属植物提取物 Solanium萃取物 500 mg N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸钠盐 HEPES钠盐 5.3 g N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸 HEPES 6.9 g 硫代硫酸钠（Na2S2O3） 乙二胺四乙酸二钠（EDTA-