Halomonas sp.TTW4盐敏感突变株的筛选与耐盐基因克隆.pdf

青岛农业大学学报 (自然科学版) 30(3)：204～ 210，2013 JournalofQingdaoAgriculturalUniversity (NaturalScience) 文章编号：1674—148X(2013)03—0204—07 Halomonassp．TTW4盐敏感 突变株的筛选与耐盐基因克隆 张 琳，郭立忠，卢伟东 (青 岛农业大学应用真菌省级重点实验室 ，山东 青岛266109) 摘要 ：TTw4是本实验室 自内蒙古盐湖 中分离得到的一株 中度嗜盐菌，经形态学、生理生化和 16srDNA序列分析 确定其属于 Halomonas属。通过紫外诱变获得该菌株具有利福平抗性的突变株 uV一1。利用三亲本杂交得到 UV一1的8株盐敏感突变株。碘结 晶法测定 UV一1和突变株胞 内甜菜碱含量，UV一1胞 内甜菜碱最多可达 190~tg／rng，盐敏感突变株胞内甜菜碱含量有明显降低 ，一般在 150~tg／mg以下，最低的只有 llO~／g／mg。以其中一 株盐敏感突变株 S3为实验材料 ，反 向PCR扩增转座子 Tn5插入位点侧翼序列，BLAST分析表 明插入位点为色氨 酸合酶 a亚基基因，推测该基 因与耐盐功能相关 。 关键词 ：中度嗜盐菌 ；盐敏感突变株 ；甜菜碱 ；耐盐基因 中图分类号：Q935 文献标识码 ：A D0I：10．3969／J．ISSN．1674—148X．2013．03．011 Constructionofsaltsensitivemutantsfrom Halomonassp．TTW 4 andcloningofthegeneinvolvedincellularosmoregulation ZHANG Lin，GUO Lizhong。LU W eidong (ProvincialKeyLaboratoryofAppliedMycology。QingdaoAgriculturalUniversity。Qingdao266109，China) Abstract：TTW 4isamoderatehalophilicbacteriastrainisolatedfrom thesaltlakeinInnerM ongoliaChi— na．TTW 4iSidentifiedasHalomonas．W egottherifampicin resistantmutantstrainUV一 1through ul— traviolet．W egot8strainsofsaltsensitivemutantstrainsfrom UV一 1bytriparentalmating．Iodinecrys— tallizingmethoddeterminationofbetainecontentofthebacteriaIcel1．UV ～ 1canaccumulatethebetaine reachamaximum of190gg／mg．Saltsensitivemutantstrainsofintracellularaccumulationofbetainecon— tenthavesignificantlylower，usuallyunder150~／g／mg，thelowestisonly110,／g／mg．LetS3asasa1t— tolerantgenescloningexperimentmaterialwhichsalttoleranceabilitysignificantlylower．InversePCR am— plificationtransposonTn5insertionallocusflankingsequence．BLAST analysisindicatesthattheinsertion siteistryptophan synthasealphasubunitgene，presumablythegenerelatedtosalttolerancefunction． Keywords：Moderatelyhalophilicbacterium ；Saltsensitivemutant；Betain