(环境监测实验）分光光度计.ppt

* * * * * * 吸收光谱体现了物质的特性，是进行定性、定量分析的基础。lmax是定性分析的依据，而溶液的浓度愈大，则吸光度A愈大，是进行定量分析的依据。 主要内容 光谱分析法 1 分光光度计 2 实验步骤和要求 3 0.208 光源 单色器 比色杯 检测器 (光电元件) 读数单元 分光光度计 紫外-可见分光光度计的基本结构示意图 光源： 可见和紫外分光光度计装有两种光源灯泡： 钨丝灯，产生可见光； 氢弧（氘）灯，产生紫外线。 由于玻璃吸收紫外线，所以氢弧灯的灯管多用石英制成，或在灯管上设有石英窗。 色散元件（棱镜或光栅） 单色器： 光狭缝 单色器的作用是将混合光分解（色散），并 可根据需要使一定波长的单色光投射至比色 槽。 比色杯： 形状大多为矩形。 比色杯的光径（溶液厚度）愈大，吸收的光能愈多，灵敏度愈高。 光电元件：光电管或光电倍增管 作用：将光能转变成电能。 光电管产生光电流的大小，与光强度和波长有关。 光电管对弱光的灵敏度大，光照过强或长时间曝光灵敏 度显著下降，即“疲劳” 现象。 温度对光电管的灵敏度有影响。 电子放大器 读数单元 读数元件 定量测定1、利用标准曲线计算测定物含量 先配制一系列浓度由小到大的标准溶液，分别测出它们的吸光度。然后以各管吸光度（A）为纵坐标，各管的浓度（C）为横坐标，在方格坐标纸上作图。 若被测物质对光的吸收符合光的吸收定律，则必然得到一条通过原点的直线，即标准曲线，亦称工作曲线。以后对末知浓度物质测定时，无需再作标准管，据测定管吸光度从标准曲线上即可求得测定物的浓度。 标准曲线(浓度-吸光度曲线） 对末知浓度物质测定时，无需再作标准管，据测定管吸光度从标准曲线上即可求得测定物的浓度。 0.2 0.8 0.4 0.6 A C ● ● ● ● ②对比法： 将标准品与待测样品在相同条件下显色并测定各自的吸光度： As = abCs； Ax = abCx Cx=Cs? Ax / As 由于测定体系温度、厚度及入射光波长一致，故标准与待测样品ab值相等，可用下式比较计算待测样品浓度： 主要内容 光谱分析法 1 分光光度计 2 实验步骤和要求 3 ??????????????????????????????????????????????????????? 722型分光光度计 722型分光光度计操作步骤 1、开机，打开盖板，预温30min； 2、将转换旋钮转至“T”，用“0”旋钮以“空白”调透光度至零； 3、盖上盖板，光路自动打开，用“100”旋钮调透光度至100%， 若不能调至100%，可调节灵敏度旋钮； 4、将转换旋钮转至“A”，此时吸光度A应为零，若非零，调节“消光零”旋钮至零； 5、拉动横杆，读取吸光度。 实验一 可见分光光度计波长校正 原理：镨铷玻璃是一种含有稀有金属镨和铷的玻璃制品，在可见光波长范围内，具有特征性的吸收光谱，吸收峰的波长固定，可作为校对仪器波长正确性的一个依据。 操作步骤： 用镨铷玻璃与空白光路作对照，每隔2nm，在529nm附近每隔1nm，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，测出波长从524nm～538nm的镨铷玻璃吸收吸光度，查找吸收峰的极值。 实验二 血红蛋白及衍生物吸收光谱测定 原理：血红蛋白在不同条件下可以形成不同的衍生物，如血红蛋白溶液在空气中与氧气充分接触可形成氧合血红蛋白HbO2 ，与一氧化碳反应则会合成碳氧血红蛋白HbCO ，高铁氰化钾能使血红蛋白中的二价铁氧化成三价铁，形成高铁血红蛋白（MHb）。 HbO2 HbCO 组成成分不同 分子结构不同 MHb 特有吸收光谱 操作步骤： 1. 样品的制备 5 ml H2O + Hb (2滴) 5 ml H2O + Hb (2滴)+ 铁氰化钾（1滴） （棕色) 2. 测定：470nm-650nm范围内，每隔20nm测吸光度一次，接近高峰时，每隔2nm测波长一次，绘制Hb