噬菌体免疫PCR技术及其在真菌毒素检测中的应用.pdfVIP

噬菌体免疫PCR技术及其在真菌毒素检测中的应用木 任显凤 张 奇 李培武 姜 俊 (中国农业科学院油料作物研究所 ，农业部生物毒素检测重点实验室 ，农业部油料产品质量安全风险评估 实验室 ，农业部油料及制品质量监督检验测试中心，武汉 430062) 摘 要 ：噬菌体免疫 PCR (Phage-mediatedimmuno-polymerasechainreaction，PD-IPCR)技术融合 了噬菌体展示技术 、 特异性抗原一抗体和PCR技术 ，是三者相结合而派生出来的一项新分析技术。本文介绍 了PD-IPCR技术的发展历程 、技术 原理及类型和技术流程中的关键实验方法 ，列举了一些噬菌体免疫PCR技术及其在真菌毒素检测 中的应用 ，并结合 PD．IPCR技术特点，分析 了PD—IPCR技术在真菌毒素混合污染 同步检测和污染预警研究等方向上 的重要应用前景 。 关键词 ：噬菌体 ；免疫 PCR技术 ；噬菌体展示 ；真菌毒素 ；同步检测 ；污染预警 随着科学技术的进步和人们生活水平 的提高． mediated immuno-polymerasechain reaction， PD— 人们对农产品的质量与安全有了更高 的标准和要 IPCR)，本文主要阐述了该项新技术的发展历程、主 求。黄 曲霉毒素 (AFT)、玉米赤霉烯酮 (ZEN)、赭曲 要内容 、特点及其在真菌毒素检测领域应用前景 。 霉毒素 A(OTA)、伏马毒素 (FMs)等真菌毒素严重 威胁农产品质量安全 ．其 中以黄 曲霉毒素最为严 一 PD—IPCR技术的发展历程 、 重 ”【。以农产 品黄 曲霉毒素为例 。它是一种毒性很 强的肝毒素．可引起肝脏 的急性或慢性损害，此 1992年 Sanot61等首次通过侨联DNA信号分子 外 ．黄曲霉毒素对 肾脏等其他多种组织器官也能造 将核酸扩增技术引入免疫反应 ．实现了蛋 白质分子 成严重损害[21。受真菌毒素污染 的农产 品包括大 的低丰度检测 。建立 了免疫 PCR (immuno．poly- 米 、玉米、花生 、小麦等大宗粮油产品，也包括坚果、 merasechainreaction，IPCR)技术 。免疫 PCR技 中药材、茶叶、饲料等与人们生活息息相关的农业产 术将免疫反应和 PCR反应相结合 ．大大凸显了 品或农产品加工品．真菌毒素 的污染无疑 已成为制 PCR反应的高功能性和强特异性．并且在检测灵敏 约农产 品安全 的重大风险隐患[3--6]。因此 ．研究建 度上 比传统的ELISA技术提高 1000--~10000倍 ．检 立真菌毒素快速高效检测技术 ．对保障农产 品安 测范围也能提高达 6个数量级阴．兼具强特异性和 全 ．保证人们身心健康不可或缺。 高灵敏度。免疫 PCR技术作为一种新的检测技术 ． 农产品真菌毒素检测方法主要包括薄层层析 具有强特异高灵敏的特点[8叫，在人 、畜及植物 的 法、高效液相色谱、免疫快速检测等技术方法 。近 病害诊断领域已用于一些抗原分子的检测m【~．” 免 年来 ．噬菌体展示技术的发展催生了真菌毒素特异 疫 PCR技术流程i12】包括抗原一抗体复合物特异性连 性的噬菌体抗体的出现 ．并将噬菌体介导的特异性 接的标记物分子的选择、抗体与标记物分子交联、 抗原一抗体反应融人传统PCR技术 ．形成了一项新 PCR反应以及结果显示分析等 ．其中抗体与标记物 的分析技术——噬菌体免疫 PCR检测技术 (Phage— 分子交联主要有链亲和素(streptavidin)介导的交联 ·基金项 目：国家 自然科学基金 ，国家公益性行业科研专项 (201203037)，国家农产品质量安全风险评估 项 目计划 (GJFP2016001)。 作者