乌骨鸡黑色素基因的克隆及真核表达载体的构建.pdfVIP

● C T ●～ AI1B111R1[Ic11uLTuRI华北农学报 ·2010，25(增刊)：2224 ,1-$1nlCl—．．—。：．．．．．：．．．．．．．．．．．． ．．．：．．：．． ．．．．．．．．一 乌骨鸡黑色素基因的克隆及真核表达载体的构建 迟 良 ，邹 明 ，孙晓凤 ，刘焕奇 (1．青岛农业大学动物科技学院山东青岛 266109；2．青岛农业大学 生命科学学院，山东青岛 266109) 摘要：采用 RT-PCR方法从乌骨鸡皮肤中克隆出黑色素主效基因黑色素皮质激素受体 (Melanocortinl—receptor MCIR)基因，长度为945bp，与普通 白鸡 比对其 同源性为99．6％。以pEGFP．N1为基础，将从测序载体 pMD一18T． MC1R上使用EcoRI和Sa／I切下的MC1R连接到同样酶切的pEGFP-N1，构建pEGFP．N1．MC1R真核表达载体，为以 后转基因动物的制备打下了基础。 关键词 ：乌骨鸡；MC1R；真核表达载体 中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1000—7091(2010)增刊 一0022—03 M olecularClongingofM elanocortin1-receptorGeneofSilkyFowlandIts ConstructionsofEukaryoticExpressingVector CHILiang ，ZOU Ming ，SUN Xiao—feng ，LIU Huan—qi’ (1．CollegeofAnimalScienceandTechndlogy，QingdaoAgriculturalUniversity，Qingdao 266109， China；2．CollegeofLifeScience，QingdaoAgriculturalUniversity，Qingdao 266109，China) Abstract：TheMC1Rgene(945bp)wasamplifiedwithPCRfrom silkyfowlSskin。Thesequenceanalysis demonstratedthathteclonedMCIR ofsilkyfowlshared99．6％ homogeneitywiht MCIR geneofGallusgallus．And hteMCIR wasdigestedrfom pMD-1·8T-M·CIR to constructeukaryotic expressingvectorwiht pEGFP—N·1plas-· mid．Theconstructedvectorsprovidedagoodbackgroundfortransgene． Keywords：Silkyfowl；MC1R；Eukaryoticexpressingvector 乌骨鸡是家禽中的一种变异鸡种，后经我国劳 制黑色素性状的主效基因连锁n¨。因此，MCIR基 动人民长期训化培养而成。其主要特点就是乌骨、 因的克隆及真核表达载体构建对进一步研究黑色素 乌皮、乌肉。乌骨鸡具有重要的药用和经济价值，并 及黑色素基因的转基因研究打下基础。 且其药用价值主要体现在体内的黑色素。 《本草纲 1 材料和方法 目》记载，乌骨鸡的人药效果与乌骨鸡皮肉骨中黑 色素的深浅有关，其颜色愈黑者，其药效愈佳。现代 1．1 材料 医学也认为，乌骨鸡的食用与药用价值主要在于其 丝羽乌骨鸡购 自青岛崂山乌骨鸡场 ，Trizol购 自 体内的黑色素物质LlJ。研究发现，乌骨鸡黑色素有 Invitrogen试剂公司，凝胶 回收试剂盒、质粒提取试 多种生理功能。医学认为，乌骨鸡体内的黑色素具 剂盒购 自BioBasic，pMD一18T、MakerDL2000、Maker 有保护功效，可以避免紫外线引起的急慢性改变，具 DI_15000，TaqDNA聚合酶、TDNA连接酶、M—MLV 有清除 自由基、抗氧化