海底沉积物中几丁质酶的筛选分离及活性分析.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３５（８）：７６８２ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 海底沉积物中几丁质酶的筛选、分离及活性分析 张瑞祥　杨　忠 （华东理工大学生物工程学院　上海　２００２３７） 摘要　目的：从海底沉积物中筛选得到一株几丁质酶活性较高的菌株，分离纯化菌株分泌的几丁 质酶，并对其活性进行酶学分析。方法：以中国南海北部湾的沉积物为样本，结合透明圈法及 ＤＮＳ法筛选菌株。采用几丁质结合能力分析及多种层析方法分离纯化菌株分泌的几丁质酶，对 其中一种几丁质酶进行酶学性质分析。结果：共筛选获得２１株几丁质酶产生菌，其中分泌的几丁 质酶活性最高的为蜡样芽孢杆菌Ｂ０４（ＢａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓｓｔｒａｉｎＢ０４）。发现该菌共分泌６种含有几丁 质结合域的蛋白。从蜡样芽孢杆菌Ｂ０４发酵液中，分离纯化得到分子量为３６ｋＤａ的几丁质酶。 研究发现，该酶是蜡样芽孢杆菌Ｂ０４的一种主要的几丁质酶，其最适ｐＨ为４．０，最适反应温度为 ２＋ ＋ ６０℃，在ｐＨ３．０～１０．０范围内活性稳定，Ｃｏ 对其活力有明显促进作用，Ａｇ有显著的抑制作用。 结论：为几丁质酶的工业化应用提供了基础。 关键词　海底沉积物　蜡样芽孢杆菌属　几丁质酶 中图分类号　Ｑ９３ 　　几丁质是自然界中总量仅次于纤维素的天然多 　　海洋是巨大的微生物资源库，海洋微生物分泌的 糖，降解后得到的衍生物在生物、能源、医疗、农业等各 几丁质酶因为其独特的自然环境，大多具有比较宽的 ［１］ ［４］ ［５］ 个方面具有广泛的应用价值 。工业化制备几丁质衍 ｐＨ值适应范围或者温度的耐受力 。Ｒａｓｈａｄ等 以 生物必须首先获得壳聚糖，这通常需要对贝壳类原材 埃及沿海地区的海水、沉积物及虾壳为样本筛选得到 料进行一定的预处理（采用强酸或强碱除去蛋白杂质 ［６］ 一株灰色链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）；Ｓｕｂｈａｓｈ等 从深海沉 ［２］ 和色素等 ），在得到壳聚糖之后普遍采用三种处理方 积物中筛选得到一株盐水微菌（Ｓａｌｉｎｉｍｉｃｒｏｂｉｕｍｓｔｒａｉｎ 法以获得衍生物，分别为：化学法、物理法和酶解法。 ＪＣ２０７），以上两株几丁质酶产生菌均具有工业化应用 其中化学法过程简单，速度快，但是缺点在于其产物中 的价值。中国同样具有丰富的海洋资源，目前在汕头 单糖较多，浓酸消耗大，易发生副反应。物理法虽然能 ［７］ ［８］ ［９］ 海域 ，南海海域 及黄海沿岸 等都有几丁质酶产 耗低，但是设备要求高，并且产物不均一［３］。利用几丁 生菌筛选工作的相关报道。本研究以北部湾沉积物为 质酶（ｃｈｉｔｉｎａｓｅ）特异性降解壳聚糖的酶解法比前两种 样本，筛选得到一株几丁质酶产生菌蜡样芽孢杆菌Ｂ０４ 方法过程简单，条件温和，产物的分子量易控制，是一 株，并优化了其产几丁质酶的发酵条件，成功分离纯化 种更为合理、高效的手段。几丁质酶广义上是指所有 菌株分泌的几丁质酶，并初步研究了该酶的酶学性质， 与几丁质降解有关的酶，而狭义上是指能特异性催化 为大规模筛选新型几丁质酶奠定了基础。 水解 １，４糖苷键的酶。工业中普遍使用的几丁质酶 β