第二章 细胞分离等-生物工程下游技术.ppt

第二章 发酵液预处理，细胞的分离、破碎 第一节 发酵液预处理 目的：分离菌体和其他悬浮颗粒；除去部分杂质和改变滤液性质 发酵液的性质： 产物浓度较低 悬浮颗粒小 固体粒子可压缩性大 粘度大 性质不稳定 第一节 发酵液预处理 常用的发酵液预处理方法： 降低液体的粘度：水稀释法、加热法 调整pH值 凝聚和絮凝 凝聚：在电解质作用下，由于胶粒之间双电层电排斥作用降低，从而胶体体系不稳定。 絮凝：在某些高分子絮凝剂存在下，基于桥架作用，使胶粒形成较大絮凝团的过程。 混凝：前两者的复合使用。 第一节 发酵液预处理 加入助滤剂 助滤剂：不可压缩的多孔微粒。硅藻土、纤维素、石棉粉、珍珠岩等。 悬浮液中大量的细微粒子吸附到助滤剂的表面上，其可压缩性下降了，滤饼疏松，过滤阻力降低了。 加入不影响目的产物的反应剂 第二节 细胞分离 A.重力沉降： 细胞体积小，沉降速度很慢 使细胞聚集成较大的凝聚颗粒，提高沉降速度 高分子絮凝剂：聚丙烯酰胺、聚乙烯酰胺等 无机的凝聚剂：中性盐（硫酸铝、氯化钙等） 细胞分离—B.离心沉降 离心分离法： 1. 差速离心（Differential centrifugation） 生化工业中最常用的离心分离法，细胞的分离为一级分级分离。实际应用中据实际物系的特点、分离目的和所需分离程度，选择适当的离心机转数和时间，可使料液中不同组分得到分级分离。 2. 区带离心（Zonal centrifugation） 事先在离心管中用某种低分子溶质调配好密度梯度，再加待处理料液后进行离心。离心时，料液中各组分在密度梯度中以不同的速度沉降，形成各自的区带而得到分离。 蔗糖、CsCl、NaBr密度梯度溶液 细胞分离—B.离心沉降 离心分离法： 低速离心，高速离心，超速离心 过滤式离心，沉降式离心 冷冻离心：低温下操作 细胞分离—B.离心沉降 离心分离设备： 实验室用离心机：离心管式转子离心机 间歇式操作 各种形式的离心机转子 细胞分离—B.离心沉降 工业用离心机：可连续操作 管式离心机， 蝶片式离心机 碟式离心机 细胞分离—C.过滤 过滤（Filtration）： 利用多孔性介质截留悬浮液中的固体粒子，进行固液分离的方法。 Filtration separates solid from a liquid by forcing the liquid? through a? solid ?support or filter medium. 细胞分离—C.过滤 通常发酵液的黏度大，其中的微生物体积小，造成过滤的困难 However the small size of microorganisms make filtration of ?biological solutions considerably more complicated. Generally, fermentation beers and other biological solutions are hard to filter because of the high viscosity or highly compressible cakes. 在过滤前，一般需对料液进行絮凝或凝聚等预处理，此外可添加助滤剂提高过滤速度。 细胞分离—C.过滤 过滤方法： 澄清过滤，滤饼过滤：P53 重力过滤，加压过滤，真空过滤，离心过滤 切向流过滤：P57- 细胞分离—C.过滤 过滤设备： 板框过滤机 细胞分离—C.过滤 板框压滤机 1. 结构：若干板，框交替排列，板，框都用支耳架在一对横梁上，用压紧装置压紧或拉开。 2. 滤板结构：凹凸纹路作用支撑滤布，提供滤液或洗涤液的流道。分为洗涤板和非洗涤板两种。 3. 滤框结构：有供料浆通过的暗孔，料浆在压差的推动下籍框两侧覆盖的滤布进行过滤分离。 4. 过滤操作液体流动路径：料浆沿1通道输入，通过滤框的暗孔进入滤框，框中的料浆在压差的推动下籍框两侧覆盖的滤布进行过滤分离。滤饼在框内两侧生成并增长，滤液通过滤布流到滤板板面的凹槽后因板面凹槽有暗孔与2、4通道相连或与3通道相连，故滤液可由三条通道流到过滤机外。 细胞分离—C.过滤 硅藻土过滤机： 硅藻土的使用方法： 作为过滤介质 作为支持介质 加入到悬浮液中 按支撑单元分： 板框过滤机，叶片式过滤机等 第三节 细胞破碎 许多生物产物在细胞培养过程中不能分泌到胞外，而保留在细胞内。 破碎细胞的目的就是使细胞壁和细