外源基因在宿主细胞中的表达2.docVIP

外源基因在宿主细胞中的高效表达- II 表达系统与表达策略 基因的表达系统 大肠杆菌 基因在酵母中的高效表达 基因在昆虫细胞中的表达—杆状病毒表达系统 根据表达蛋白的用途选择基因的表达策略 (以利用大肠杆菌进行基因表达为例) 生物化学与分子生物学研究 着重考虑的问题是：如何保持蛋白质的原有功能不变 表达策略：直接表达天然蛋白（尽量可溶） 表达融合蛋白最好带有特异性酶切位点，可以将天然蛋白切下来） 表达蛋白用作抗原 获得包涵体 获得融合蛋白（如：带His6标签） 结构研究 要求：蛋白质必须是以可溶形式表达的 基因在大肠杆菌中的高效表达 (1)表达系统 (2)融合表达 (3)分泌型表达 (4)包涵体形式表达与蛋白质复性 (1)表达系统（大肠杆菌pET表达系统为例） 载体 受体菌 载体. 例：pET-28 主要构成元件： T7噬菌体启动子 T7噬菌体终止子 核糖体结合位点 His6标签序列 凝血酶切割位点 多克隆位点 乳糖操纵子和 乳糖阻遏子序列( lac I） pBR322复制子 f1噬菌体复制子 卡那霉素抗性基因 乳糖操纵子和乳糖阻遏子序列的作用： 当目的蛋白对大肠杆菌有毒性时，可以通过添加阻遏物，控制目的蛋白以较低水平表