双向型转录扩增.PDFVIP

第三章 雙向型轉錄擴增 第一節 概述 RNA易受環境酵素的影響不易保存。但藉由固相存檔之設計與和 one step real-time RT PCR之技術結合。能夠有效的將檢體以固相 cDNA模板保存下來，有效解決問題。 生物素上建置特異性引子探針來抓取目標檢體mRNA ，並於進行 RT PCR時完成第一股固相 cDNA ，之後放入一特殊設計的連接子，此 連接子會形成stem loop的結構並設計與 T3 promoter互補之序列，因此 再延伸第二股cDNA時能夠產生 T3 promoter之序列而形成一雙向 cDNA保存模板，以cDNA的型式保存能有效克服 RNA不易保存的難 題，且可以轉錄出雙向的 RNA 。 進行Reverse tramscription 形成第一股cDNA並加入linker 延伸第二股cDNA 圖 3-1固相模板生成示意圖。固相引子於低溫下會自形成一回圈構造，藉由 PCR反應加熱展開並 延伸出cDNA模