口腔微生物观察方法涂片.PPT

 （四）多细胞真菌-曲霉（示教） 于显微镜高倍镜观察其菌丝和孢子形态。 曲霉菌 100倍 曲霉菌 400倍  （四）多细胞真菌-不染色观察 1.直接镜检：将长有真菌的平板直接放在显微镜下用低倍镜观察菌丝和孢子。 2.涂片检查：取棉兰染液1滴于玻片上，用接种环取少量真菌的菌丝于棉兰中混匀，盖上血盖片，尽量不要产生气泡，低倍镜或高倍镜下观察菌丝和孢子。 3.胶带法镜检：取一小段透明胶带，粘取少量霉菌菌落贴在玻片上，低倍镜或高倍镜下观察菌丝和孢子。  （一）目的 二、口腔微生物观察 了解口腔微生物的种类 口腔为人体四大“菌库”之一。 口腔为机体正常微生物定植的最佳生态区。 温度：36.5～37 ℃ 湿度：适宜 pH：5.4 ～ 7.0 营养：丰富的营养源。 * 口腔微生物是人类最早发现的微生物。 细菌学之父 Antony van Leeuwenhoek ( 1632-1723 ）在 1679 年用自制的显微镜观察到牙垢上的各种球形、 杆状和螺旋形的“小动物”，这就是我们现在认识的球菌、 杆菌和螺旋体。 口腔微生物群 * 目前有关口腔微生物分布的研究主要是细菌，其次是真菌，对病毒、支原体和原虫等口腔微生物分布的文献鲜见。 细 菌 真 菌 病 毒 原 虫 口腔微生物群 * 在一项出生 1～2 天的新生儿口腔菌群调查中发现，在新生儿口腔中检出与母亲口腔中相同血清型的唾液链球菌 。 一项对父子（女）或母子（女）口腔内中间普雷沃菌的检测，也发现了相同血清型的中间普雷沃菌在父子（女）或母子（女）口腔中存在。 研究者们在剖腹产的新生儿口腔 中未检查出细菌，由此认为人出生 时口腔一般是无菌的。 来源:父母或亲密接触的人 唾液链球菌是新生儿口腔中最早定植的链球菌菌种， 98%以上的新生儿在出生后 1～2 天，即可从口腔中分离到唾液链球菌。 以上这些研究结果 均提示了细菌来源于新生儿的母亲或密切接触的人，以及口腔细菌在亲属或家庭中流行 或传播的可能性。 1.菌种 自取：无菌棉签自取口腔标本获得 2.试剂 革兰染液 抗酸染液 3.其它材料 无菌棉签，载玻片，染色盘，染色架，洗液瓶，酒精灯 等。  （二）材料 1.细菌涂片的制备 涂片 干燥 固定  （三）口腔微生物观察方法 涂片： 1）画涂片区：同革兰染色； 2）取1滴生理盐水于涂片区； 3）如图将无菌棉签放入口腔，唾液湿润棉签后擦 取内表面牙垢附近取样，之后立即与涂片区生 理盐水混合制成细菌涂片。 干燥和固定方法同革兰染色 冲洗 染色完成之后，在涂片区滴上香柏油使用油镜观察实验结果 2.革兰染色 ①龙胆紫液 ②碘液 ③脱色液 ④沙黄溶液复染 吸水纸吸干 10s 10s 10~20s 10s 冲洗，甩干 冲洗，甩干 冲洗，甩干  （四）口腔微生物观察方法 (1)细菌涂片的制备（取样同革兰染色） 涂片 干燥 固定 (2)染色 1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3 滴，在火焰高处（2-10cm）徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，加热3～5min，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，待标本冷却后用水冲洗。 2）脱色： 3%盐酸酒精脱色30s～1min；用水冲洗。 3）复染：用碱性美兰溶液复染1min；用水冲洗后用吸水纸吸干。 （3） 用油镜观察 3.抗酸染色 口腔上皮细胞和细菌 1000倍  （一）目的 三、牙菌斑生物膜检测 了解牙菌斑生物膜的概念 了解牙菌斑检测的意义 1.牙菌斑生物膜（dental plaque biofilm) 是黏附于牙面、口内修复体和矫治器表面由微生物及 胞外多聚物（extracellular polymeric substance, EPS）等 组成的，软而未矿化，与口腔感染性疾病密切相关的，有 高度组织化和系统化的膜性聚合物。  （二）牙菌斑生物膜简介 * 2.特点 黏附力强，不易被水冲去或漱掉。 胞外物质基本成分：水、蛋白质、多糖、脂质和无机物等。 由唾液蛋白或糖蛋白选择性吸附至牙面， 形成一层无细胞、无结构的薄膜 。 3.牙菌斑生物膜的形成和发展分3个阶段 （1）获得性薄膜的形成 作用