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大蒜素提取工艺的探讨 指导教师：包清彬 姓名：余秋永 班级：生物工程4班 学号1 前言 1.大蒜素的介绍 （１）大蒜是百合科葱属植物蒜的鳞茎，以鳞茎、花茎、嫩叶为主要产品，基产品营养丰富（每100g大蒜中含有硫胺素0.24、蛋白质4.4g）味道鲜美，能增进食欲，并有杀菌作用，对冠心病、高血压、动脉粥样硬化症等有防治作用，此外大蒜素对霉菌有明显的抑制作用，是理想的抗菌剂原料。 （2）提取大蒜素的方法主要有3种：水蒸气蒸馏法、有机溶剂提取法和超临界萃取法。水蒸气蒸馏法所需设备简单，操作方便，但是其大蒜素提取率很低。超临界萃取法提取率高、品质好，但生产成本高、设备复杂、操作技术难度大。 本次实验采用有机溶剂乙醇提取大蒜素并进行其工艺探讨。确定其影响因素及最佳工艺参数。 2 实验材料与仪器 1.实验材料及试剂 大蒜（购于红光菜市场） 无水乙醇、95%乙醇、氯化钡 、氢氧化钠、浓硫酸、浓硝酸、浓盐酸（以上试剂均为分析纯）、甲基橙、pH试纸、蒸馏水 2.实验仪器 JA2003型电子天平 JJ-2组织捣碎匀浆机 KXH101-24型干燥箱 抽滤装置（布氏漏斗、SHB-3循环水多用真空泵) HH-S数显恒温水浴锅 722型光栅分光光度计 DZF-6020型 真空干燥箱 5810 R型冷冻离心机（Centrifuge） 80-2BT台式低速离心机 可调电炉 （2）提取工艺： 大蒜－去皮洗净－捣碎－酶解－萃取－离心分离－上清液－减压浓缩－浓缩大蒜素溶液 （3）操作要点 将剥好皮的大蒜用组织捣碎机捣成蒜泥，用电子天秤称取10g样品，加入适当浓度的有机提取溶剂乙醇，在适当的温度下酶解适当的时间，然后在适当的温度下萃取适当的时间，萃取后拿去离心分离机在3000rad/min下离心半个小时，离心后取上清液在减压蒸馏装置下适当减压浓缩，即得到浓缩后的大蒜素粗提液。 2.大蒜素的测定 （1）测定原理 大蒜中蒜氨酸的亚砜基 和大蒜素的硫代砜基被浓硝酸氧化成硫酸根离子与氯化钡反应形成硫酸钡沉淀，根据硫酸钡的重量，换算出大蒜素的含量。 （2）测定方法 往浓缩的大蒜提取液加入浓硝酸3ml～4ml,用玻璃棒搅拌均匀，入置20min,过滤并洗入100ml容量瓶中，定容到刻度。放入150ml烧杯中，加入0.1%甲基橙指示剂5滴， 滴加10%氢氧化钠溶液至黄色，用1：1盐酸调节pH＝2～3之间。在电炉上加热至微沸，趁热加入10ml 15%氯化钡溶液，搅拌均匀，在90℃水浴上保温2h，搅拌均匀后取10ml在低速离心机离心半个小时。取上清液作为空白对照在680nm下测溶液的吸光度，再对比附录Ⅰ硫酸钡浓度与光密度值的标准曲线算出硫酸钡的量，从而推算出大蒜素的含量。 （1） 式中：32.06:硫分子量；233.39：硫酸钡分子量；c：硫酸钡的浓度；V：测定提取液体积（ml）；162.26：大蒜素分子量；m：大蒜素的重量。 （3）氯化钡浓度与光密度值的标准曲线 配置5.6ppm、4.48ppm、3.36ppm、2.24ppm、1.12ppm五种浓度的硫酸钡溶液，用蒸馏水作空白对照，用712型分光光度计在波长680 nm下测定其吸光值A。画图做出氯化钡浓度与光密度值的标准曲线。 实验数据 硫酸钡浓度/ppm 吸光度 5.6 4.48 3.36 2.24 1.12 0.00 0.385 0.326 0.249 0.175 0.088 0.000 3.单因素及正交实验考察 1）单因素实验考察 （1）酶解温度对大蒜素提取率的影响 将大蒜用组织捣碎机捣成蒜泥，取5份样品(每份20 g)，分别在30、35、40、45和50℃水浴锅中放置0．5 h，然后加入体积分数(下同)95％乙醇80 ml于30℃下萃取1 .5h，离心分离、减压浓缩后测定萃取液中的大蒜素含量。 （2）酶解时间对大蒜素提取率的影响 将大蒜用组织捣碎机捣成蒜泥，取5份样品(每份20 g)，分别在40 ℃下酶解0.3、0.5、1、1.5和2小时，然后加入体积分数(下同)95％乙醇80 ml于30℃下萃取1.5 h，离心分离、减压浓缩后测定萃取液中的大蒜素含量。 （3）乙醇体积分数对大蒜素提取率的影响 将大蒜用组织捣碎机捣成蒜泥，取5份样品(每份20 g)，在40℃水浴锅中放置0．5 h，然后分别加入体积分数65%、75%、85%、95％乙醇80 ml于30℃下萃取1.5 h，离