四 培养基配制与无菌技术课件.pptVIP

一、实验目的 掌握微生物常规培养基的制备方法 学习无菌技术 学习玻璃器皿的包扎 实验四 微生物培养基的配制与无菌技术 二、实验内容 1、6种培养基的配制 牛肉膏蛋白胨培养基（细菌） 高氏一号培养基（放线菌） 马丁氏培养基（真菌） 淀粉培养基（淀粉水解试验） 蛋白胨水培养基（吲哚试验） 葡萄糖蛋白胨水培养基（V.P试验） 2、 移液管、培养皿、三角瓶、试管等的包扎 3、灭菌 实验四 微生物培养基的配制 无菌水的准备 三、实验原理 培养基medium:用人工的办法将多种营养物质按微生物生长代谢的需要配制成的营养基质。 水、C源、N源、矿物质、生长因素/因子、微量元素 培养基种类： 天然培养基、合成培养基、半合成培养基 固体培养基、液体培养基、半固体培养基 基础培养基、加富培养基、选择性培养基、鉴别培养基 实验四 微生物培养基的配制 四、实验步骤 配制培养基的流程： 原料称量、溶解 调节pH值 (加琼脂熔化) (过滤)定容 分装 塞棉塞/扎口 灭菌 培养基分装装置 棉塞的做法 a)棉塞的制作过程 (b)正误棉塞 培养皿的包扎 五、无菌技术 在(利用微生物)进行研究实验或生产过程中，采用物理和化学的方法技术，保证培养物不受环境微生物的污染，同时也不允许操作的微生物扩散到环境中去。 如高温灭菌、过滤、紫外线照射处理等。 五、无菌技术 灭菌与消毒 灭菌Sterilization：用物理或化学的方法来杀死或除去材料上或环境中的所有微生物的处理。 消毒Disinfection：用物理或化学的方法杀死物体上绝大部分微生物（主要是病原微生物和有害微生物）的处理。消毒实际上是部分灭菌。 防腐(Antisepsis)：防止或抑制霉腐微生物在食品等物质上的生长 化疗(Chemotherapy)：杀死或抑制宿主体内的病原微生物 抑制(Inhibition)：生长停止，但不死亡 死亡(Death)：生长能力不可逆丧失 常用的灭菌方法 干热灭菌 热蒸汽灭菌 常压灭菌 过滤除菌 射线灭菌 化学药物灭菌 1、火焰灭菌 微生物接种工具如接种环、接种针或其它金属用具等可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行灭菌。 这种方法灭菌迅速彻底。 接种过程中，试管或三角瓶口等，也可通过火焰灼烧灭菌。 2、干热灭菌 用干燥热空气（160℃, 1~2h）杀死微生物 培养皿、漏斗、吸管、玻璃器具、解剖刀，接种、镊子、剪刀等能耐高温的器皿 晾干后用牛皮纸包好 温度升到100℃，开箱内鼓风机 培养基、橡胶塑料制品不能用此方法 注意安全 干热灭菌箱 鼓风钮 温度调节器 指示灯 温度调节旋扭 温度计与排气孔 3、湿热灭菌 常压蒸汽间歇灭菌 将待灭菌的培养基或物品装入常压灭菌器内，加热至100℃大量产生气体时,维持30—60min,每天灭菌一次,连续灭菌三天.每次蒸煮间隙里,培养基或物品应放在室温(20--30℃)条件下培养,第一次蒸煮杀死微生物的营养体,芽孢则在培养过程中萌发成营养体;第二次蒸煮即可杀死.经过二次培养,三次反复蒸煮,即可达到完全灭菌。 常压蒸汽持续灭菌 高压蒸汽灭菌 3、湿热灭菌 常压蒸汽间歇灭菌 常压蒸汽持续灭菌 常压蒸汽持续灭菌中,从蒸汽大量产生开始,继续加大火力保持充足蒸汽,持续加热3—6h,杀死绝大部分芽孢和全部营养体,达到灭菌目的。 高压蒸汽灭菌 3、湿热灭菌 高压蒸汽灭菌 原理：水的沸点随压力的增加而提高。水在密闭的加压蒸汽灭菌器中煮沸，产生蒸汽驱除锅内冷空气后，使蒸汽不能逸出，因而增加了锅中的蒸汽压力。蒸汽压力提高，水的沸点随着上升，因而能够获得比100℃更高的蒸汽温度，用来进行有效的灭菌。 同一温度下，湿热灭菌法比干热灭菌法效果好 蒸汽穿透力强 蛋白质含水量高，易于凝固 手提式灭菌锅 安全阀 压力表 放气阀 软管 紧固螺栓 灭菌桶 筛架 水 卧式灭菌锅 是指含菌液体或气体通过细菌滤器，使杂菌留在滤器或滤板上，从而除去杂菌。 常用于许多不宜用湿热灭菌的液体物质，如抗生素、血清、糖类溶液等。 用于除菌的细菌过滤器，是由孔径极小，能阻止挡的陶瓷、硅藻土、石棉或玻璃粉等制成.为了加快过滤,一般多采用抽气减压的方法,进行操作。 4、过滤除菌 过滤除菌 辐射灭菌(Radiation Sterilization)是利用电磁辐射产生的电磁波杀死大多数物质上的微生物的一种有效方法。 用于灭菌的电磁波有微波，紫外线(UV)、X-射线和γ-射线等。 5、射线灭菌 * * * *