转酿酒酵母HOG1基因拟南芥植株的获得与检测.pdfVIP

每 此 磨业 掌搪 2010，19(4)：86—90 ActaAgriculturaeBoreali—occidentalisSinica 转酿酒酵 基因拟南芥植株的获得与检测 岳 华 ，杜向红 ，吕树作 ，方桂英 ， 李 康 ，王 乐 。，聂小军 。，宋卫宁 (1_西北农林科技大学 农学院，陕西杨凌 712100；2．陕西省农业分子生物学重点实验室，陕西杨凌 712100) 摘 要 ：HOGJ(highosmolarityglycerol，HOG1)是酵母 中参与耐高渗透压调控 的重要基 因。根据 已发表的 酿酒酵母序列，设计特异引物 ，扩增到完整 的HOG1基 因；构建植物表达载体 pBI121一HOG1，通过农杆菌介导 转化拟南芥 ，获得转化植株种子 。对收获的T。代种子进行卡那霉素抗性筛选 ，并通过 PCR和 RT-PCR对抗 性苗进行检测。结果表明，构建的载体成功转化拟南芥，并获得了13份~()tHOG1基因苗。 关键词 ：日OG1基 因；构建植物表达载体 ；拟南芥转化 中图分类号：Q785 文献标识码 ：A 文章编号：1004—1389(2010)04—0086—05 TransformationofArabidopsisthaliana withSaccharomyces cerevisiaeHoGlGene YUE Hua ，DU Xianghong ，LU Shuzuo ，FANG Guiying’ LIKang ，WANGLe ，NIEXiaojun，andSONGWeining (1．CollegeofAgronomy，NorthwestAFUniversity，YanglingShaanxi 712100，China；2．KeyLaboratory ofAgricultureMolecularBiologyofShaanxiProvince，YanglingShaanxi 712100，China) Abstract：HOG1 isan importantregulatory factorwhich regulatesresponseto high osmolarity in Yeast．Inthispaper，thefull—lengthHOG1genefrom thegenomicDNA ofSaccharomycescerevisiae wasisolatedwithPCR techniqueusingprimersdesignedaccordingtothepublishedsequence．Toiden— tifypotentialfunctionofthisgeneinplant，expressionvectorpBI121-HOG1wasconstructed，andthen transformedintoArabidopsisthalianabyAgrobacteriumtumefaciens—mediatedmethod．Totransgen- icseedswerescreenedonM SplatecontainingKanamycin．AfterPCR andRT—PCR，13positivetrans- genicseedlingswereidentified，providingmaterialforfurtherstudieson thefunction ofH OG1gene anditsinteractionwith othergenesin plants． Keywords：HOG1gene；Constructionofplantexpressionvector；Arabidopsisthalianatransformation 生物体在长期的进化过程 中，形成 了精确而 tedproteinkinasesignalingtransductionpath～ 敏感 的环境适应机制，可以精准激活体 内的信号 way，HOG—MAPK)是酿酒酵母对外界高渗透压 转导途径 ，从而对外界