番荔枝节律钟输出基因AsGI的克隆、亚细胞定位与表达分析.pdfVIP

园艺学报，2015 ，42 (12) ：2395 –2404. Acta Horticulturae Sinica doi ：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0456；http ：//www. ahs. ac. cn 2395 番荔枝节律钟输出基因AsGI 的克隆、亚细胞定 位与表达分析 * 刘锴栋，袁长春 ，黎海利，陈 燕，刘金祥 （岭南师范学院生命科学与技术学院，广东湛江 524048 ） 摘 要：GIGANTEA 基因在植物开花和生理节律变化过程中起着重要作用。利用同源克隆和 RACE-PCR 的方法获得番荔枝 GIGANTEA 基因的全长 cDNA 序列，命名为 AsGI ，GenBank 登录号为 KR095281 。序列分析表明，克隆获得的番荔枝AsGI 基因长为 3 465 bp，编码 1 154 个氨基酸。氨基酸序 列比对显示与葡萄和油棕的 GI 的相似度分别为 77%和 76% 。构建类似蛋白系统进化树显示，番荔枝 AsGI 与香蕉、海枣、油棕等分子进化距离较近。预测 AsGI 蛋白为转录因子，定位在细胞核中，为非分泌性蛋 白质，不具备信号肽。同时构建了该基因融合 GFP 的植物表达载体，通过农杆菌介导瞬时转化烟草上表 皮细胞并在荧光显微镜下观察，发现在烟草上表皮细胞的细胞核中有绿色荧光。实时定量 RT-PCR 结果表 明，在不同的器官中，AsGI 的表达量存在差异，在叶片、花蕾和成熟花中的表达量相对较高。AsGI 呈现 昼夜节律表达模式，长日照下叶片中AsGI 在白昼的表达高于短日照处理。在 4 月、6 月和 8 月，AsGI 的 表达量相对较高。该基因可能作为番荔枝花期调控分子育种的目标基因。 关键词：番荔枝；GIGANTEA；生物节律钟；亚细胞定位；表达模式 中图分类号：S 667.1 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2015 ）12-2395-10 Cloning，Subcellular Localization and Expression Analysis of Circadian Clock Output Gene AsGI from Sugar Apple * LIU Kai-dong ，YUAN Chang-chun ，LI Hai-li ，CHEN Yan，LIU Jin-xiang （Life Science and Technology School ，Lingnan Normal University ，Zhanjiang ，Guangdong 524048 ，China ） Abstract ：GIGANTEA gene plays an important role in several molecular regulations in plant ，such as flowering and circadian rhythm oscillation ．A full-length cDNA sequence of homologous GIGANTEA gene was cloned by employing homology gene cloning and RACE-PCR from sugar apple （Annona squamosa L. ），which was named as AsGI （GenBank accession KR095281 ）. Sequence analysis showed that the AsGI gene has a 3 465 bp open reading frame （ORF ）encoding 1 154 amino acids. Sequence alignment displayed that it was a similarity of 77% and 76% with GIGANTEA of Vitis vinifera，Elaeis guineensis ，respectively. The phylogenetic tree showed that su