光激化学发光免疫检测技术与临床应用研究进展.pdfVIP

光激化学发光免疫检测技术与临床应用研究进展 高云朝 近半个世纪以来，临床化学微量免疫分析技术从放射免疫分析、酶联免疫分析，到化学 发光免疫分析，经历了检测方法的革新与技术的进步，医学检验质量和数量得到了迅速的提 高；20世纪90年代问世的LOCI(Luminescent oxygen channeling immunoassay，LOCI)技术以 其独特的检测方法，实现了均相、一步、免清洗和高通量的检测，并以其高灵敏度和特异性 [1] 等突出的检测性能为世人所瞩目。该技术最初由Ullman等 在1994年报道，由美国德灵公司 研发成功，后由PerkinElmer公司生产相关试剂(AlphaScreenTM) ，西门子公司生产免疫诊断试 剂（LOCI ）。国产光激化学发光免疫检测系统由博阳生物科技（上海）有限公司建立在该技 术之上，并称之为LiCA （Light Initiated Chemiluminesence Assay，LiCATM ）。仅此对该技术 基本原理和特点，以及目前国内外研究现状综述如下。 一、技术原理和特点 1．LOCI检测原理：基于非竞争的免疫检测方法类似于ELISA ，而基于的竞争的免疫检 测方法类似于放射免疫分析法。以前者为例，双抗体夹心结构(抗体包被发光珠-抗原-生物素 化抗体)与链霉亲和素包被的感光珠，通过链霉亲和素与生物素结合到一起，并拉近发光珠 和感光珠的间距。然后，感光珠在680nm激发光的照射下，使周围氧分子激发变成单线态氧 1 ( △O ，带有1个激发态电子的氧分子) ，后者扩散至发光珠并传递能量，发光珠发射520-620 g 2 nm荧光信号并被光子计数器探测。此过程中，单线态氧的半衰期只有4μs，且最大扩散距离 大约200nm 。而一般而言，当体系中不存在抗原抗体复合物时，发光珠和感光珠之间的距离 大于200nm 。因此，此三级发光系统只有结合态发光珠才能传递单线态氧的能量并发光；非 [1-6] 结合态发光珠由于相距较远，无法获得能量而不发光 ( 图1)。 作者单位：200233 上海交通大学附属第六人民医院核医学科 注：光激化学发光检测时，a 图为感光珠和发光珠结合时则发光，b 图为感光珠 和发光珠不结合则不发光 图1 光激化学发光检测感光珠和发光珠的原理示意图 2 ．技术特点：光激化学发光技术的特点是基于偶联在供体-受体微球表面的发光物质经 光激发和能量传递而诱导发光，能量传递依赖于受体-配体结合所致的供体-受体微球相互靠 近而实现，而常见的受体-配体系统如抗原-抗体、生物素-亲和素、蛋白酶-底物。其采用纳 米级微粒作为固相载体，增加了反应的比表面积，极大地提高了检测灵敏度和缩短了反应时 [1-2] 间；恰当的荧光波长及时间分辨计数模式，有效提高了信噪比，增加了特异性 ；均相反 应模式实现了一步、免清洗检测。检测过程不易受到荧光淬灭、样本常见干扰物质、pH值、 [7-9] 离子强度及温度等因素的影响，保证了检测的稳定性 。样本用量少(一般2.5μl) ，易于实 [10] [7] 现机器的小型化和样本的高通量检测 ，且有利于基于小动物的基础研究 。 二、国内外研究现状和应用 光激化学发光技术应用广泛，涵盖蛋白质、多肽激素、核苷酸等领域，在受体／配体、 蛋白质／蛋白质、蛋白质／DNA之间相互作用方面的研究成果，对发病机制的研究和新药 研发具有重要指导意义。 (一)小分子半抗原 1．地高辛：临床检验急症项目要求准确而快速的结果回报(TAT)，。目前，全自动化 学发光法的反应时间一般为18 min；LOCI法通常只需要5 min，甚至可以缩短至l min，且不 明显影响其检测性能，有效检测范围为0.5-5μ