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对血浆c-反应蛋白一种潜在的炎症生物标志物进行高灵敏度-waters
[ 应用纪要 ]
对血浆C-反应蛋白(一种潜在的炎症生物标志物)进行高灵敏度且
可重现的LC-MS定量分析
Paula Orens, Mary Lame, Steven Calciano和Erin Chambers
沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德)
应用优势 简介
1
实现蛋白质生物标志物的高灵敏度定量分析; C-反应蛋白(CRP) 在肝脏中天然合成,并作为炎症响应因子被释放到血液中。
采用基于通用试剂盒的方案进行蛋白质定量, 因此,通过测定CRP来诊断类风湿性关节炎(RA)2,4等慢性炎症以及评估心血
3 4
分析速度快、重现性佳;Xevo® TQ-XS质谱仪 管疾病风险和炎性癌变过程 的方法受到广泛关注。组织损伤或炎症会使血
带来高灵敏度优势;应用混合模式SPE的样品 浆CRP浓度升高100倍以上2 。健康个体的内源性血浆CRP浓度相对较低,一
制备方案具有高专属性,无需亲和纯化操作。 般为0.1 3 µg/mL (4 120 nM)2 ,但患者体内的CRP浓度却高出许多,要实
现准确定量,需要使用多重ELISA或比浊免疫法3 。由于需要进行多重测试,
样品浓度范围往往会超出配体结合试验(LBA)方法的线性动态范围。除了这
一固有劣势之外,还有很多其它原因促使业界逐渐转向采用LC-MS方法,
例如缺乏标准化方法、可能发生交叉反应、成本高昂、难以保证试剂配制的
一致性等等,而这些只是众多原因中的一小部分。质谱检测在蛋白质定量方
面拥有诸多优势,如灵敏度高、专属性高、线性动态范围宽、方法开发速度
快以及可进行多重分析等。不过,蛋白质的LC-MS定量方法仍然面临许多难
题。目前这种方法还没有形成一套标准化的工作流程,而现有的各种工作流
程往往复杂又繁琐,使得科学家们难以成功完成分析。本应用纪要介绍了一
种通用试剂盒方案,相较于文献中耗时长达24 h的标准方法5 ,该方法仅需
2 h即可完成酶解。酶解和后续的肽纯化步骤采用ProteinWorks eXpress直
接酶解试剂盒(部件号:176003688)和ProteinWorks µElution SPE净化试
沃特世解决方案 剂盒(部件号:186008304)完成,以准确、可靠地定量人血浆中的内源性
ProteinWorks™ eXpress直接酶解试剂盒 CRP。采用上述试剂盒及其随附的方案,我们仅使用35 µL血浆样品就达到
ProteinWorks µElution SPE净化试剂盒 了0.025 0.1 µg/mL (1 4 nM)的LLOQ。
ACQUITY UPLC® HSS T3色谱柱
ACQUITY UPLC系统
Xevo TQ-XS质谱仪
MassLynx®软件
TargetLynx™应用软件
关键词
C-反应蛋白,CRP,生物标志物,蛋白质酶解,
胰蛋白酶肽,蛋白质定量,Pr
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