根癌农杆菌介导的芥菜型油菜高效遗传转化.pdfVIP

第 31卷 第 4期 四JIl农业大学学报 VolJ31 No．4 2013年 l2月 JournalofSichuanAgriculturalUniversity Dec．2013 doi：10．3969／j．issn．1000—2650．2013．04．003 根癌农杆菌介导的芥菜型油菜高效遗传转化 巩 健 ，张 源。 ，杜立 国。 (1．淄博职业学院制药与生物工程系，山东 淄博 255000； 2．青海师范大学生命与地理科学学院，西宁 810008 3．中国科学院遗传与发育生物学研究所农业资源研究中心，石家庄 050021) 摘要 ：【目的】建立芥菜型油菜 (Brassicajuncea)高效遗传转化体系。 【方法1以芥菜型油菜带柄子叶为材料，采用农 杆菌介导的转化方法，将外源基 因导入芥菜型油菜愈伤组织，并获得再生植株。 【结果】外植体在侵染前，预先在含 2mg／L6-BA+0．5mg／LNAA+6mg／LAgNO。的MS培养基上进行预培养 2～3d。侵染 6～8min后转入共培 养培养基中2～3d，之后转到含 10mg／L卡那霉素的MS筛选培养基上进行筛选培养 2～3周。对成活植株进行 GUS染色和 PCR验证 ，证明外源基 因已经成功转入芥菜型油菜 的基 因组 中。 【结论】通过优化愈伤组织诱导条件 和农杆菌侵染时间，可显著提高芥菜型油菜 的遗传转化效率。 关键词 ：芥菜型油菜 ；子叶柄 ；遗传转化 中图分类号：$565．4 文献标志码 ：A 文章编号：1000—2650(2013)04—0377—04 EfficientAgrobacterium—mediatedTransformation ProtocolofBrassicajuncea GONG Jian ，ZHANG Yuan。～，DU Li一8uo。 (1．PharmaceuticalandBioengineeringDepartment，ZiboVocationalInstitute，Zibo255000，Shandong，China 2．CollegeofLifeScienceandGeography，QinghaiNormalUniversity，Xining810008，China； 3．CenterforAgriculturalResourcesResearch，InstituteofGeneticsandDevelopmentalBiology， ChineseAcademyofSciences，Shijiazhuang050021，China) Abstract：[Objective]Toestablishanefficientgenetictransformationsystem ofBrassicajuncea． [Method]TheexogenousgenewastransferedintoBrassicajunceaScalli，cotyledonarypetioleas themateria1forcalli，byAgrobacterium-mediatedtransformationandregenerationplantswereob— tained．WeoptimizedtheAgrobacterium—mediatedtransformationprocedureofBrassicajunceaby studyingthecallusinductionofcotyledonarypetioleandplantgrowthregulators．[Results]The cotyledonarypetioleexplantswerepreculturedonMSmediumcontaining2mg／L6一BA，0．5rag／ LNAA，and6mg／