经大豆dna溶液处理后选育的变异水稻基因组-上海师范大学学报.pdfVIP

维普资讯 第3ll卷第 3期 悔师范大学学报 (自然科学版) Vol3(1， 0 3 2n01年 0月 J．ofShanghaiTeachersUniv (NaturalScienc~) K． ep ．2 O 0 1 经大豆DNA溶液处理后选育的 变异水稻基因组 RAPD分析 李建粤，许 燕，徐 超，范士靖 (上海师范大学 生命与环境科学学院，上海 200234) 摘 要：利用花粉管通道法和浸种及苗期浇灌法．将供体 大豆DNA直接导入 受体水稻． 获得 两种水稻 变异株 系．采用 RAPD技术对供体大豆 、受体水稻 和两种水稻 变异株 系的 基 因组进行 了多态性分析．所用31种10n基随机引物 中有2d种扩增 出清晰的DNA鲁带， 分析比较了4个样品DNA扩增奈带的相似率．根据试验结果分析 ，外源大豆DNA导入 受 体水稻能引起后代基 因组 DNA序列变化，扩大水稻的遗传组成 }作者还分析了由外源大 豆DNA导入引起受体水稻产生变异现象的原因 关键词 ：水稻 ；大豆；外源DNA：随机扩增多态性 DNA(RAPD) 中图分类号 ：$330 文献标识码 ：A 文章编号 ：】000—5137(2001)030046—06 0 引 言 在改 良水稻、小麦等禾本科作物的营养品质育种方面，最主要是提高籽粒的蛋 白质含量．方金 良等人 一曾利用水稻与玉米的远缘杂交和DNA直接导人法将玉米DNA导入水稻 ．提高水稻的蛋 白质含量．朱新产等人 利用 DNA直接导人法将豌豆花 DNA导人小麦 ，使小麦后代籽粒蛋 白质 含量 明显提高， 我们也曾经利用 DNA直接导人法中的花粉管通道法和浸种及苗期浇灌法 ，以大豆为供体．将 大豆 DNA导人受体水稻 ，采用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示水稻后代种子贮藏蛋白有变异现 象一]；采用微量凯 氏定氮法和氨基酸 自动分析仪分析显示水稻后代种子蛋白质和赖氨酸含量都有 明显提高 ． 方金 良等人认为，水稻蛋白质含量主要受遗传基 因的控制，但不能忽视环境与栽培措施的影 响．汤圣祥 也认为稻米蛋白质含量存在着较大的环境变异．为了确定我们已得到的水稻表现 出的 高蛋白变异现象，究竟是 由于环境 因素造成，还是 由于遗传组成 的改变所致 ，我们利用 RAPD技 术，对两种经大豆 DNA不同处理获得的变异株系的基因组 DNA进行分析，并与其供体和受体相 比较 ，试图从 DNA分子水平上寻找水稻蛋白质含量变异的直接证据． 收稿 日期 ：2001—04屯7 基金项 目：上海市科技发展基金资助项 目(9831】3008) 作者简介 李建粤(1958一)，女，上海师范大学生命与环境科学学院副教授 维普资讯 第3揭 李建粤．许 燕 ．等 竖大豆DNA溶液处理后选育的变异柬稻基因组 RAPD许析 1 材料与方法 1．1 供试材料 本试验材料共有4个：作为外源 DNA供体 的南农87一C38太青豆 ((；lycinen )是由南京农业 大学大豆研究所提供的常规大豆 ；水稻受体越光粳稻 (Oryv．asatiwasubsp poni,a)由上海农科院 作物所提供；从分别采用两种处理(花粉管通道法和浸种及苗期浇灌法)，已表现蛋白质含量变异的 株系中各选出一个株系．4个供试材料以供体大豆、受体水稻 、花粉管通道法处理得到的变异水稻和 浸种及苗期浇灌法处理得到的变异水稻为顺序．编号分别为 A，B，c．D． 1．2 试验方法 1_2．1 模板 DNA制各 大青豆干种子经蒸馏水浸泡24h后，剥取胚根和胚芽，水稻种子发芽后取幼叶，进行 DNA提 取一““J，被提取的大青豆 DNA和水稻 DNA最终溶解在 TE中 经紫外光测 出计算浓度后置 一 20C备用． 1．2．2 RAPD分析 1．2．2．1 引物 所用随机引物为生物工程有限公司产品，每一随机引物为l0个碱基的寡聚核苷酸 ．试验用31个 随机引物的编号为 Sl～Sl0，Sl2，S14，Sl6．