右美托咪定预处理对大鼠缺血再灌注肝脏TNF―α和ICAM―1表达影响.docVIP

右美托咪定预处理对大鼠缺血再灌注肝脏TNF―α和ICAM―1表达影响 　　【摘要】 目的：通过右美托咪定预处理对大鼠缺血再灌注肝脏TNF-α及ICAM-1表达的影响，探讨其对肝脏缺血再灌注的保护作用。方法：SD成年雄性大鼠30只，体重150～220 g。随机平均分为3组，每组10只，分别为假手术组（S组），缺血再灌注组（IR组），右美托咪定组（Dex组）。S组和IR组用1 mL/（kgh）速度静脉滴注0.9%生理盐水30 min；Dex组用右美托咪定5μg/（kgh）预处理30 min。间隔2 h后IR组和Dex组建立肝脏缺血再灌注模型，S组开腹后不作缺血再灌注。缺血1 h后行再灌注4 h，然后处死大鼠取材。测定大鼠血清ALT和AST，检测肝组织TNF-α活性和ICAM-1水平，观察大鼠组织学病理改变。结果：与S组比较，IR组和Dex组血清ALT、AST和肝组织TNF-α和ICAM-1表达明显升高。Dex组血清ALT、AST酶升高幅度明显较IR组小，肝组织TNF-α和ICAM-1表达低于IR组，肝细胞损伤程度小于缺血再灌注组。结论：右美托咪定预处理能抑制肝缺血再灌注细胞的TNF-α和ICAM-1表达；TNF-α可能通过调控ICAM-1的表达在缺血再灌注损伤中发挥作用。 【关键词】 右美托咪定； 缺血预处理； 再灌注损伤； 肝 在肝脏切除、肝移植等手术或合并肝硬化、失血性休克患者的手术中，肝缺血再灌注损伤是常见并发症，引起临床上广泛关注[1]。肝脏缺血再灌注不但不能使肝组织细胞功能恢复，反而加重了肝脏功能障碍和结构损伤，影响手术的预后。而药物预处理（pharmacological preconditioning， PPC）操作简单，只需要使用药物无需其他特殊仪器设备，安全阈大，近年临床上常用于肝脏缺血再灌注的研究[2]。Teoh等[3]研究表明，小剂量TNF-α预处理可明显改善小鼠肝脏缺血再灌注损伤。右美托咪定作为一种新型的高选择性α2肾上腺素能受体激动剂，因其具有镇静、催眠、抗焦虑、镇痛及交感神经抑制等作用，近年常用于神经、心脏、肾脏及肺的保护研究。但其对肝脏缺血再灌注的保护作用，目前仍未见有报道。本研究拟通过观察右美托咪定对大鼠肝脏缺血再灌注后TNF-α和ICAM-1表达水平的影响，了解其减轻肝脏缺血再灌注损伤的可能机制。 1 材料与方法 1.1 实验动物及分组 雄性SD大鼠30只，体重150～220 g，年龄8～10周，由中山大学实验动物中心提供。空调室内饲养，室温（20±2）℃，相对湿度保持在（55±10）%，自由进食水，术前12 h禁食，但不禁水。随机分为3组：S组，IR组和Dex组，每组10只。 1.2 实验处理 假手术组（S组）给予生理盐水静滴1 mL/（kgh）30 min，间隔2 h后仅开腹；肝脏缺血再灌注组（IR组）给予生理盐水静滴1 mL/（kgh）30 min，间隔2 h后行肝脏缺血1 h，再灌注4 h；右美托咪定预处理组（Dex组）给予Dex 5 μg/（kgh） 30 min，间隔2 h后行肝脏缺血1 h，再灌注4 h。 1.3 肝缺血再灌注模型的建立 腹腔注射3%戊巴比妥钠40 mg/kg麻醉后，将大鼠仰卧位固定，腹部脱毛，腹正中线开腹，游离肝脏周围韧带，显露第一肝门，分离肝左叶及中叶的肝动脉、门静脉、胆管分支，并使用无创血管钳夹闭行肝脏部分缺血，以防止发生严重肠系膜淤血。缺血60 min后恢复再灌注，然后用丝线逐层关腹后置鼠笼中恢复，单笼饲养，禁食但不禁水：维持大鼠肛温36～37 ℃。 1.4 血清ALT和AST测定 再灌注4 h后处死大鼠，留取腹主动脉血5 mL，3000 r/min离心10 min，分离血清，分装不同的Eppendorf管中，-20 ℃冰箱保存。应用7600型全自动生化分析仪测定ALT和AST活性。 1.5 细胞形态结构检测 各组于实验结束后均取下大鼠肝脏，用10%的甲醛溶液固定24 h，75%酒精梯度脱水，然后石蜡包埋，切片做HE染色，用光镜观察细胞形态结构变化。 1.6 免疫组织化学法检测TNF-α、ICAM-1的表达 用免疫组织化学两步法将防脱石蜡切片染色。TNF-α浓度和ICAM-1浓度均为1：50，用PBS代替一抗作为阴性对照。阳性是细胞膜和胞浆出现棕黄色颗粒。应用CIAS-1000型细胞图像分析系统，每组随机选择5张切片，每张切片随机选择5个高倍视野，检测相应测试区域的平均灰度及其相应面积、阳性反应产物的平均灰度及其相应面积，根据申洪免疫组织化学染色定量方法求得阳性单位（Positive Unit， PU）[4]。 1.7 统计学处理 采用SPSS 13.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表