病毒检验技术课件.ppt

能使红细胞完全凝集的病毒的最高稀释倍数为该病毒的血凝效价，此效价为1个血凝单位（HAU） 第二节 病毒的分离与鉴定 《微生物学检验》 国家卫生和计划生育委员会规划教材 《微生物学检验》 国家卫生和计划生育委员会规划教材 《微生物学检验》 国家卫生和计划生育委员会规划教材 国家卫生和计划生育委员会规划教材 第十七章病毒检验技术 本 章 内 容 第一节 标本的采集、处理与运送 1 第二节 病毒的分离与鉴定 2 第三节 病毒学检测及诊断 3 学习目标及重点 学习目标： 掌握病毒标本采集和送检应遵循的原则；病毒检验鉴定常用技术 熟悉病毒血清学诊断常用的方法 了解病毒感染的实验室快速诊断 学会病毒的培养基本操作 本章重点： ★病毒标本采集和运送原则。 ★病毒学诊断及鉴定常用方法。 ★病毒培养的基本操作。 病毒学检验技术是用实验室检验方法对临床和流行病学现场送检的标本（如人或宿主的血液、组织、尿、粪便和组织液等）进行病毒学的定性和定量分析，为病毒感染和病毒性疾病的诊断、治疗和预防提供科学依据。 检验程序包括标本的采集、分离培养鉴定、快速诊断。 第一节 标本的采集、处理与运送 一、标本的采集与处理 2.采集部位：取决于临床症状和所怀疑感染的病毒。 从病原体入侵部位取材 从病原体感染的靶器官取材 根据病原体的排泄途径取材 从环境中采集标本 如：流感病毒感染------鼻咽拭子 乙型脑炎病毒感染------脑脊液 轮状病毒感染------粪便 乙型肝炎病毒感染------血液 第一节 标本的采集、处理与运送 一、标本的采集与处理 3.采集方法与处理 提高病毒的分离率，防止标本污染。 采集时无菌操作,可加入抗生素以杀死杂菌 二、标本的运送与保存 1.标本的运送 尽快送检 冷冻、冷藏运输 防漏、专人、标记 2.标本的保存 -70℃可较长时间保存 可加入甘油或二甲基亚砜（DMSO）、Hanks液或小牛血清等以防病毒失活 第一节 标本的采集、处理与运送 不同的病毒分离时采用不同的分离方法,这主要取决于目的病毒的生物学特性。 主要有细胞培养法、鸡胚培养法、动物接种法等,而对细胞、鸡胚不敏感,又没有合适动物模型的病毒,可采用基因克隆的方法。 第二节 病毒的分离与鉴定 一、 病毒的分离培养 2.鸡胚培养 第二节 病毒的分离与鉴定 原代细胞培养 二倍体细胞培养 传代细胞 羊膜腔接种 尿囊腔接种 卵黄囊接种 绒毛尿囊膜接种 组织细胞培养 鸡胚培养 动物接种 是将离体活组织块或分散的组织细胞加以培养的技术总称，为病毒分离鉴定中的最常用的基本方法。 （一）组织细胞培养 鸡成纤维细胞 Hep-2细胞 细胞培养瓶 Vero细胞 第二节 病毒的分离与鉴定 1.原代细胞 原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞。原代细胞的培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。 2.二倍体细胞 是指原代细胞在体外分裂50代以后仍能保持其二倍染色体数目。二倍体细胞株来源于正常人胎儿组织，主要用于培养病毒制备疫苗等。 3.传代细胞 传代细胞来源于肿瘤细胞或细胞株传代过程中变异的细胞称为传代细胞，它们能在体外无限期地传代。大多是肿瘤细胞或突变的二倍体细胞。 常用的传代细胞株有Hela细胞（人宫颈癌细胞），Hep-2（人喉上皮癌细胞）、Vero（非洲绿猴肾细胞）等。 * 2.鸡胚培养 第二节 病毒的分离与鉴定 鸡胚培养法是用来培养某些对鸡胚敏感的动物病毒的一种培养方法，此方法可用以进行多种病毒的分离、培养，毒力的滴定，中和试验以及抗原和疫苗的制备等。 * 一般选用9～14d的鸡胚 来源充足、 组织分化程度低、 本身很少携带病毒和细菌、 对接种病毒不产生抗体及 病毒较易增殖等 2.鸡胚培养 优点： 第二节 病毒的分离与鉴定 选择不同的接种部位是病毒分离成功的关键 常用的主要有： 尿囊腔接种、羊膜腔接种、卵黄囊接种、绒毛尿囊膜接种 2.鸡胚培养 第二节 病毒的分离与鉴定 不同病毒在鸡胚的不同部位的生长特性差异很大 2.鸡胚培养 尿囊腔接种 羊膜腔接种 尿 囊 腔 羊 膜 腔 常用接种途径： 尿囊腔接种、羊膜腔接种、卵黄囊接种、绒毛尿囊膜接种 常用于流感病毒、流行性腮腺炎病毒 和新城疫病毒的适应和传代培养 常用于临床流感病毒初次分离 第二节 病毒的分离与鉴定 卵黄囊接种 绒毛尿囊膜接种 卵 黄 囊 绒毛尿囊膜 人工气室 羊膜腔 气室 绒毛尿囊膜 尿囊腔 卵白 2.鸡胚培养 主要用于虫媒病毒、衣原体及立克次