抗除草剂棉花LLCOTTON25的多重PCR检测方法.pdfVIP

棉 花学 报 Cotton Science 20 16袁28 1冤院11―17 除草剂棉花LLCOTTON25 的多重PCR 检测方法 1 2 1 1 1 1 1 1 3* 尹全 李忆 宋君 王东 张富丽 刘文娟 常丽娟 雷绍荣 刘勇 1. 川省农业科学院分析测试中心袁 川成都6 10066 曰2. 四川民族学院袁 川康定626001 曰3. 四川省农业科学院植物 保护研究所袁 川成都610066 ﹚ 摘要院为了建立1 种抗除草剂棉花LLCOTTON25 多重PCR 检测方法袁根据抗除草剂棉花LLCOTTON25 分 子特征袁 同时选择棉花内源参照基因 冤尧 花椰菜花叶病毒启动子 P-CaMV 35S冤尧 根癌农杆菌终止子 T-NOS 冤和目的基因 冤4 个基因作为多重PCR Polymerase chain reaction 冤检测基因袁参照国家相关标准中 的特异性引物序列袁通过对反应条件的优化以及方法特异性和灵敏度测试袁建立了可同时检测除内源基因外 的3 种外源目的基因的多重PCR 检测体系遥 利用已知样品对本体系验证袁抗除草剂棉花LLCOTTON25 能被 同时检出 尧P-CaMV 35S尧T-NOS 尧 等4 个基因袁而其他样品均不能被同时检出这4 个基因遥 结果表明 此体系可运用于抗除草剂棉花LLCOTTON25 检测遥 关键词院棉花曰LLCOTTON25 曰多重PCR 曰检测曰CaMV 35S 曰T-NOS 中图分类号院S562.035 文献标志码院A 文章编号院1002-7807(2016)01-001 1-07 10.11963/issn.1002-7807.201601002 1 2 1 1 1 1 1 1 Yin Quan , Li Yi , Song Jun , Wang Dong , Zhang Fuli , Liu Wenj uan , Chang Lij uan , Lei Shaorong , Liu Yong3* 1. 626001, ; 3. 6 10066, 冤 This study aimed to establish a multiplex PCR detection method for the herbicide-resistant cotton line, LLCotton25. We selected the endogenous cotton reference gene , the cauliflower mosaic virus promoter (P-CaMV 35S), terminator(T-NOS), and the target gene( ) as detection genes for multiplex PCR.We optimized PCR reaction con- ditions using sequences of specific Chinese national standard primers, and tested its specificity and sensitivity. The multiplex PCR detection system was then used to successfully detect the four genes , P-CaMV 35S, T-NOS, and from the herbi- cide-re