微生物检验基本要求.ppt

* * * * * * 二级防护屏障 是生物安全实验室和外部环境的隔离 也称二级隔离 保护目标：环境、实验对象 感染性废物的处理 感染性废物: 携带病原微生物具有引发感染疾病传播的废物 常见种类: 病原体的培养物 菌、毒种保存液 血液 排泄物等各种医学样本 各种一次性用品或器械 《医疗废物管理条例》 国务院 2003年6月16日 《医疗卫生机构医疗废物管理办法》 卫生部 2003年8月14日 分类收集 定点保存 暂时保存 防止泄漏、扩散或意外事故 紧急处理措施和安全防护 感染性废物的处理 Thank you ! * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 灭菌指示物 化学指示物 仅指示灭菌温度，但不涉及灭菌时间和压力 生物学指示物 指示灭菌需要的温度、时间和压力 注意：指示物在以下情况下不保证灭菌的效果： 高压锅内东西放的过多；培养液体积过大； 灭菌后的生物验证试验十分重要 药敏实验 为选择合适的抗生素进行治疗提供依据 监测耐药趋势 体外药敏实验 无明显的生长 有明显的生长 敏感 不敏感 药物 目标菌 肉汤稀释法 药敏试验中可能出现的错误 培养基不好——太陈旧，厚度，pH 过期或保存不当的药片—— 活性降低 错误的接种—— 细菌接种量太多或太少 错误的孵育—— 温度太热/太冷，时间 太长/太短 错误的仪器设备 —— 读错区带 错误的解释 —— 曲解区带 药敏检测 孵育条件、温度和时间 肠杆菌科： 35 ℃±2 ℃，空气，16-18h 葡萄球菌属：33-35 ℃,空气， 16- 18h， 苯唑西林和万古霉素需24h观察 肠球菌属： 35 ℃ ±2 ℃ ，空气，16-18h， 万古霉素需24h观察 嗜血杆菌属： 35 ℃ ±2 ℃， 5%CO2 16-18h 链球菌属： 35 ℃ ±2 ℃， 5%CO2， 20-24h 药敏实验的质量控制 质控菌株必须有可靠的来源 使用特定的质控菌株去检测不同的药物-目标菌组合 按照厂家的说明储存抗生素试剂 药敏试验质量控制 培养基 抗生素 菌液 培养箱 菌种 药片 M-H培养基 保存温度 McFarland 0.5 (108 bacteria / ml) 温度 气压 保存条件，使用要求 保存条件（温度、干燥） ATCC标准株， 4mm厚，pH -20oC 以下 分光光度计检测 标准的温度计气压计 标准菌株、待测菌株 纸片分配器 优点 实用，快速 提高了可重复性 缺点 增加污染的机会 降低了人员判断技能等 保存 使用之后，放回冷藏箱，朝上放置。 操作者的熟练度 常规的能力验证 室内实验程序 完全按照SOP进行实验操作 质量控制：免疫学-血清学 针对抗原-抗体检测试验 每天至少有一次试验带上阳性和阴性对照。包括弱阳性对照 所有孵箱，摇床和离心机的功能监控 质量控制：分子诊断 样品采集，运输和处理 保证所有上述过程中核酸的完整性 控制污染 在无DNA区域，配制试剂后进入样本处理区，再进入扩增和检测区；并保持这一单向流程 阳性和阴性对照 参考：感染性疾病的分子诊断方法 目的： ?存活，不丢失，不污染  ?防止优良性状丧失  ?随时为生产、科研提供优良菌种 原理： 选用优良的纯种（最好是休眠体，如分生孢子、芽胞等） 创造降低微生物代谢活动强度 生长繁殖受抑制 难以发生突变的环境条件 其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养 以及添加保护剂等  菌种保藏： 菌 连续在培养基上（内）移种 种 生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上（内）移种 保 固体斜面 藏 湿法 半固体琼脂柱 方 休眠态 液体介质（蒸馏水、