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胰蛋白酶抑制剂的研究进展谭竹钧 ,沈明才 ,张峰 ,胡华平(广东工业大学 轻工化工学院 ,广东 广州 510090 )摘要 : 胰蛋白酶抑制剂是对胰蛋白酶具有抑制作用的一类物质 . 综述了近几年来 ,用不同原料制备胰蛋白酶抑制剂的研究进展及临床应用 .关键词 : 胰蛋白酶抑制剂 ;基因工程 ;治疗疾病中图分类号 : TQ464. 7文献标识码 : A文章编号 : 100727162 ( 2007 ) 03蛋白酶抑制剂 ( T I)是对胰蛋白酶具有抑制作用的一类物质 . 最早是由 Kun itz从牛胰腺中提取的 胰蛋白酶抑制剂 ,现在发现在动物 、植物 、微生物中都广泛存在 ,并且不同来源的胰蛋白酶抑制剂具有不同的相对分子质量 、氨基酸组成 、氨基酸序列及分 子结构. 分子中的活性部位是赖氨酸 ,抑制作用主要 是与胰蛋白酶等酶的丝氨酸结合 ,使其失活 . 在临床 广泛用于治疗胰腺炎 、休克和脑外科 、手术止血等 . 胰蛋白酶抑制剂通过抑制激肽释放酶以及纤溶酶而 达到止血的目的 ,能显著减少手术中及手术后病人的出血 ,临床研究表明其副作用小 、安全性好 [ 1 ] . 本 文对近几年胰蛋白酶抑制剂的制备研究及在医疗中的应用进行综述.使用 .王增禄等 [ 3 ]设计胰脏多酶联产实验对胰蛋白酶 抑制剂进行了探讨 . 制备了 Tryp sin2Sep ha ro se 4B 亲和层析柱 ,采用硫酸铵 、三氯醋酸沉淀 ,离心 、色谱 、冷冻干燥等技术 ,对猪胰脏中胰蛋白酶抑制剂进行 分离纯化 ,用 1 kg胰脏制得 15 m g胰蛋白酶抑制剂 , 酶比活为 2 1089 ×103 k IU /m g蛋白 .Kish im u ra 等 [ 4 ] 在 太 平 洋 褶 柔 鱼 ( Toda ro2despacif icus)的肝脏中分离得到一种分子质量为 63×103 u 的 T I,并研究了其稳定性 、氨基酸组成以及 抑制作用的特点等 ,发现该 T I对酸 、热稳定 ,能有效抑制胰蛋白酶 ,并可抑制肌原纤维自身的溶解 .J ung等 [ 5 ] 在鲣鱼 ( Ka tsuw onuspelam is) 的卵中提3取分离获得一种分子质量为 39 ×10 u 的 T I, 其在体内以二聚 体 的 形 式 存 在 , 在 pH 410 ～1010 有 活 性 ,当温度高于 40 ℃时较大程度失活 ; 在不同金属离子如 K+ 、N a + 、M g2 + 、Ca2 + 存在时其活性增强 ,而Cu2 + 的存在却导致失活 .Jo lan ta Kowa lska 等 [ 6 ] 从成熟的 Cyc lan the ra p e2da ta 中提取了 CyPT I I2V II 7种新型的胰蛋白酶抑制 剂 ,它们包含 28 ～30 个氨基酸 , 分子质量 31031 ×103 ～31367 ×103 u,这 7种抑制剂都强烈抑制 αβ -牛胰蛋白酶 ,而对牛糜蛋白酶抑制则很弱.112 从人尿中提取人尿胰蛋白酶抑制剂 ( HU T I) 是一种丝氨酸蛋 白酶抑制剂 ,表观分子质量为 67 ×103 u,等电点为 2～3. 它是一种糖蛋 白 , 糖 的质 量分 数 高达 20 % ～30 %. 人尿中的抑肽酶不同于由牛肺 、胰提取的抑 肽酶 ,它对人体不产生抗原抗体反应 ,更适于临床 .1 胰蛋白酶抑制剂的制备1. 1 从动物脏器中提取牛肺胰蛋白酶抑制剂 (也称抑肽酶 ) 的分子质量为 612 ×103 u,是由 58个氨基酸残基组成的碱性 多肽. 它的一级结构和二级结构均已阐明 ,分子内有3 对二硫键 ,整个分子呈梨型 , 活性中心为赖氨酸 ,位于分子的顶端. 从分子质量看有两类 ,一类是分子 质量较大的 ;一类是分子质量较小的 .宋扬等 [ 2 ] 将化学改性与修饰壳聚糖体 ,共价偶 联配基牛胰蛋白酶 ,制成固定化酶为抑肽酶亲和吸附剂 ,直接对黄牛肺提取液一步层析纯化 ,再超滤脱盐 、浓缩 、去热原 ,冻干即抑肽酶. 抑肽酶比活 517 ×103 k IU /m g,收率 22 ×104 k IU / kg (牛肺 ) ;固定化酶 单位活力 21595 ×103 k IU / g (干 ) , 酶 活 性 回 收 率55 % , 非 特 异 性 吸 附 较 小 , 机 械 强 度 高 , 可 反 复收稿日期 : 2006 212 228基金项目 : 广东工业大学人才基金资助项目 ( 052056 ) ;广东省自然科学基金资助项目 ()作者简介 : 谭竹钧 ( 19552) ,男 ,教授 ,主要研究方向为生物化学制药 .第 3期谭竹钧 ,等 :