分析 第九章 吸光光度法.ppt

第九章 吸光光度法 9-1吸光光度法的基本原理 9-2光度计及其基本部件 9-3显色反应及显色条件的选择 9-4吸光度测量条件的选择 9-5吸光度法的应用 提示： 吸光光度法的基本原理： 物质对光的选择吸收、朗伯-比尔定律、偏离比尔定律的原因 光度计及其基本部件： 光度计的结构、主要部件、各部分的作用 用吸光度法进行定量分析 标准曲线法 9-1吸光光度法的基本原理 简介： 吸光光度法： 基于物质对光的选择吸收而建立的分析方法 吸光光度法包括： 比色法、可见分光光度法、紫外分光光度法 比色法：比较待测溶液的颜色深浅测定物质的浓度 分光光度法：计量物质的吸光程度 吸光光度法的优点： 灵敏度高（浓度下限10-5~10-6mol·L-1）；相对误 差小于2%~5%；测定迅速；操作简单；应用广泛。∥ 物质对光的选择吸收 物质发光的原因： 在可见光区，不同波长的光呈现不同的颜色 当一束白光通过有色溶液时，一些波长的光被溶 液吸收，另一些波长的光则透过。溶液的颜色由 透射光的波长所决定。吸收光与透射光为互补色 物质颜色与吸收光颜色的互补关系 当一束光照射到某物质或其溶液时，组成该物质 的分子、原子或离子与光子发生“碰撞”，光子的能量 被分子、原子所吸收，使这些离子由最低能态（基 态）跃迁到较高能态（激发态）： M + hv → M＊ （基态） （ 激发态） 光子的能量被分子、原子吸收的条件： 照射光的能量（hv）与被照射物质粒子的基态和 激发态能量之差相当时才能发生吸收 物质对光的选择吸收： 不同物质微粒由于结构不同而具有不同的量子化 能级，能量差也不相同，物质对光有选择性吸收。 讨论： 不同物质吸收曲线形状和λmax各不 相同（定性依据） 不同浓度同一物质最大吸收波长不 变，浓度增加吸光度值增加（定量依据） ★ 吸收曲线是吸光光度法定量分析时选择测 定波长的重要依据 例：铁(Ⅱ)质量浓度为5.0×10-4g·L-1的溶液，与1，10 – 邻二氮杂菲反应，生成红色配合物。该配合物在波长 500nm，比色皿厚度为2cm时，测得A=0.19计算1，10 - 邻二氮杂菲亚铁的a及? 解：a =A /bc = 0.19 / 2×5.0×10-4 = 190L·g-1·cm-1 ? = Ma = 55.85×190 = 1.1×10-4 L·mol-1·cm-1 偏离朗伯比尔定律的原因 化学因素引起的偏离 单光束分光光度计： 吸收池：盛装样品试液 玻璃——仅适用于可见光区 石英——适用于紫外和可见光区 要求：匹配性 （对光的吸收和反射应一致） ☆双波长分光光度计 显色剂 9-4吸光度测量条件的选择 因为吸光度在0.2～0.8范围内测量的读数误差较 小，所以，应尽量使吸光度读数控制在此范围内，为此 可采取以下措施： 透光率的测量误差-ΔT 9-5用吸光光度法进行定量分析 芦丁含量测定 两组分吸收光谱完全重叠—混合样品测定 本章小结： 9-1吸光光度法的基本原理 物质对光的选择吸收、朗伯-比尔定律 9-2光度计及其基本部件 光源、单色器、吸收池、检测器、显示器 9-3显色反应及显色条件的选择 显色剂的要求、显色条件、 9-4吸光度测量条件的选择 入射波长、参比溶液、显示器读数范围 9-5吸光度法的应用 标准曲线法、多组分的测定 作业：P271-1、2、3、4 多组分分析 设某溶液中含有x和y两种组分，其浓度分别为c(x) 和c(y)，它们的吸收光谱可能会出现如图所示的几种 情况： 1．两组分吸收光 谱不重叠 （互不干扰） 2．两组分吸收光 谱部分重叠 3．两组分吸收光 谱完全重叠—— 混合样品测定 解线性方程组法 * * I0 It 650~780 红 蓝绿 600~650 橙 绿蓝 580~600 黄 蓝 560~580 黄绿 紫 500~560 绿 紫绿 490~500 蓝绿 红 480~490 绿蓝 橙 450~480 蓝 黄 400~450 紫 黄绿 波长/nm 颜色 吸收光 物质颜色 1 2 3 4 B 纯电子跃迁 A 双原子分子能级跃迁 △E = hv = hc/λ 吸收曲线： 将不同波长的光透过某一固定浓度和厚度有色溶液，测量每一波长下有色溶液对光的吸收程度