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多底物_酶反应动力学_实例
第三章 酶动力学 多底物酶反应动力学(续) 一 Ordered BiBi 动力学公式推导 多底物动力学公式推导比单底物的复杂很多,因此用King-Altman图解法进行推导。 分母 简化表示法系数的速度方程 Km表达式 Haldane关系式 分母各项逐项转换 分子分母各项都有V2,约去后即可得到动力学速度方程。 转换操作要点: 1)设法利用动力学常数与简化表示法系数关系式。 2)非用不可时才用多定义的KiP和KiB。 3)直接转换不便时利用Haldane关系式把num2变为num1。 速度方程: 初速度方程 King-Altman方法步骤小结 ?1)??写出反应历程。 2)??安排成封闭几何图型。 3)写出n-1线的所有可能图形扣除封闭n-1线图。 4)根据图形写出各个[Ei]/[Et]表达式。 5)写出分母,为所有分子之和。 6)写出生成产物的速度方程,简化表达式。 7) 写出各动力学常数表达式,包括V,Km,Ki,Keq。 8)利用第七步的表达式变换第六步的速度方程,得到用动力学常数表示的速度方程。 9)只讨论初速度时,产物浓度为0,得到初速度方程。 双倒数作图及讨论 选择一个底物,如A为变化底物(variable), 另一底物B固定于某一浓度(fixed changing), 根据双倒数公式,以1/V对1/[A]作图可得直线,其斜率为KmA/V1+KiAKmB/V1[B], Y轴截距为1/V1+ KmB/V1[B]。所以当[B]增大时,直线的斜率降低, Y轴截距也降低。 由双倒数公式,以B为变化底物,A为固定变化,以1/V对1/[B]作图可得直线,当[A]增大时,直线的斜率降低, Y轴截距也降低。 任选二个B的浓度B1和B2,代入双倒数公式得到二个二元一次方程,该方程组的解即为两条直线的交点坐标: 双倒数作图 二次作图 1/V对1/[A] 为一次作图,二次作图公式: Slope = KmA/V1+KiAKmB/V1[B], Yint = 1/V1+ KmB/V1[B]。 一次作图斜率对1/[B]作图的截距KmA/V1,斜率KiAKmB/V1;一次作图截距对1/[B]作图的截距1/V1,斜率KmB/V1。 由两个二次作图的斜率和截距的值可以计算得到V1, KmB, KmA, KiA等各参数。 二 Ping Pong BiBi 的动力学公式 三 快平衡随机反应 四 动力学历程讨论及判断方法 实验 1. 选择变化底物和固定变化底物; 2. 按照单底物动力学底物浓度选择原则两个底物各选定5-6个左右浓度; 3. 每个固定变化底物浓度下进行变化底物不同浓度的酶反应速度测定; 4. 全部固定变化底物浓度实验完成后作双倒数一次作图,得到各直线斜率和截距; 5. 讨论动力学机制,作二次作图得到各动力学参数。 课外练习(记分) 用King-Altman方法推导乒乓双双反应的动力学速度方程,并作初速度方程的双倒数作图及讨论。 The END ? 推导作为作业,同学们课后完成。 * * 酶 学 Enzymology 2)组成封闭图形: 4)写[Ei]/[ET]表达式: Ki表达式也是两个系数的比值,其注脚字母分母比分子多该配基,但不能是Km表达式。Ki可能有多个表达式,但只能按需选用其中一个。 表示不同B浓度的双倒数直线将交于一点。 *
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