MyiQ说明书.doc

简介 在分子生物学的发展史上，聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，简称PCR）的发明可以说是一个里程碑。它使得极其微量的基因片段呈指数倍的增长，从而使其可以被现有分子生物学中广泛使用的检测手段对其进行深入的分析。PCR的整个操作流程也相对比较简单，易于推广。而实时荧光检测技术在PCR中的应用又将PCR过程和产物检测过程合二为一，缩短了实验时间，减少了PCR产物污染的可能性，并可以实现靶DNA的PCR定量检测。 MyiQ实时荧光定量PCR仪就是一台综合了PCR技术和实时荧光检测技术的检测仪器。它由iCycler热循环仪、MyiQ光学模块和MyiQ分析软件三部分组成。其中iCycler热循环仪内部设有96个反应孔，可以进行PCR及其它热循环基因扩增技术（如LCR、3SR等）。用户可以根据各自的需要调节反应的各个参数如保温的温度和时间、升/降温速度、热循环次数等，整个热循环系统的精确性、均一性等性能都是十分出色的。 MyiQ光学模块的作用是在iCycler热循环仪进行PCR反应时进行实时荧光信号的收集。它可以同时收集96个反应孔中的单色荧光信号。这些数据可以用来进行PCR定量、熔点曲线等分析。 MyiQ分析软件则是实现人机对话的关键，用户可以通过该软件设置反应条件、样品信息，又可以将实验中收集的数据进行分析从而得到可靠的实验结果。 图1.1 MyiQ实时荧光定量PCR仪 1.1 MyiQ 光学模块特性 MyiQ光学模块包括两个组成部分：激发系统和检测系统。激发系统内有以下组件：一个风冷扇、一个50瓦卤素灯、一块热滤片（由红外线吸收玻璃制成）、一块激发滤光片、一套分光系统（由两块镜片组成，将单道光源分为96道光源从而实现96孔同时检测）。激发系统位于MyiQ光学模块的右前角，卤素灯所发出的光线由右至左垂直穿过热滤片和激发滤光片，然后通过分光系统分成96道光线射入iCycler热循环仪的96个反应孔中。 图1.2 光学检测系统工作原理 检测系统的体积越占整个MyiQ光学模块的2/3，包括一块单色发射滤光片和一套350，000像素的CCD检测器。CCD检测器可以定量的检测各个反应孔内荧光强度。 注意：系统软件所需的电脑配置见附录B。 尽量避免灰尘等微小颗粒沾染到镜片或透镜上。 警告：用户不可自行擦拭MyiQ光学模块内的任何光学镜片和透镜，这有可能严重破坏光学系统。如MyiQ光学模块发生问题，请联系伯乐公司。 1.2 MyiQ 系统的连接 MyiQ系统连接共需要4根连接线（见图1.3）。 圆型9针电源线：MyiQ 光学模块的电源线。 注意：为避免光学系统短路，请用户在连接该线前将电源开关关闭（“O”位），同时操作过程中请保持双手干燥。 并口线：通过这根25针并口线（雄端）可将MyiQ光学模块和电脑连接起来。电脑上要有一个兼容IE1284的8位双向并行接口或EPP型并行接口。MyiQ系统通过该连线将收集到的数据传入电脑。 微型电话插头接线：在MyiQ 光学模块有两个微型电话插头接口，一个连接电源，一个连接CCD检测器。该连线就是将这两个接口连接起来。其作用是一旦发现CCD检测器发生光溢出，系统内部立刻产生信号通过CCD检测器的接口端传输到电源接口端，强制切断电源，起到一个保护作用。 串口线：通过该接线将iCycler热循环仪和电脑连接起来。 图1.3 MyiQ连接侧视图 MyiQ实时荧光定量PCR仪操作速成 2.1 简介： MyiQ实时荧光定量PCR仪可以最多同时检测96个样品，系统在PCR反应过程中的信号收集时段内得到各孔的荧光信号，系统软件通过这些数据点绘制出荧光强度变化曲线。在反应结束后，用户可以通过系统软件分析这些数据曲线，从而得到所需的数据结果。 MyiQ系统每次运行都需要用户在系统软件中设置两个文件：反应程序文件（Protocol file，后缀名.tmo）和反应板设置文件（Plate Setup file，后缀名.psm）。而实验中收集的数据会被系统储存为光学数据文件（Optical Data file，后缀名.odm） 此外，MyiQ的每次运行还需要孔间差异因子（Well Factor）的数据。这个数据的作用是消除反应的孔间差，使得最终的结果更为准确。用户最好在每次运行前都进行一次孔间差异因子数据的更新，当然如果用以前实验中统计的数据，也是可以的。具体的内容详见5.4.2。 2.2 MyiQ软件操作速成： 2.2.1 总揽 1. 接通电源，打开系统软件。在反应运行前，MyiQ光学模块必须预热30分钟以上。 选择或创建一个反应程序文件（Protocol file）。 选择或创建一个反应板设置文件（Plate Setup file）。 以选定的反应板设置文件运行选定的反应程序文件。 以