USP微生物检测精要.ppt

微生物实验室规范 1117微生物实验室规范 重要的控制点 无菌技术 培养基控制 菌种控制 设备控制 实验室布局和运作 数据文件控制 员工培训 微生物实验室规范 无菌技术 防止和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作方法和管理方法 ——无菌环境 ——灭菌 ——消毒 ——卫生要求 ——无菌操作技术 微生物实验室规范 培养基 微生物实验室工作质量的核心是培养基，应根据既定的目的选用正确的培养基。 生产商应提供相关的CoA和说明书 ——配制 ——储存 ——菌种选用 水 ——纯化水，去离子水，蒸馏水 ——记录用量 成分的测量 ——校准过的天平，天平的量程应准确 ——清洁的容器和工具 ——记录称量 微生物实验室规范 培养基 不要过度加热 ——加热帮助溶解，通常培养基变深说明过度加热 ——添加剂加入后需充分混合 清洁的玻璃器皿 ——防止外来污染和抑菌剂 ——1051玻璃器皿清洁 微生物实验室规范 培养基 灭菌条件 ——供应商提供参数，或自己验证 ——高压蒸汽灭菌，过滤除菌 ——验证应考虑无菌和培养基生长能力 ——湿热灭菌要考虑装载分布，通常121℃ 15min 微生物实验室规范 培养基 灭菌条件 ——在无菌和过度加热之间平衡 ——消毒锅灭菌结束后，不建议在其中存储培养基 ——不正确的加热、灭菌条件会影响培养基的 颜色 澄清度 pH 凝固能力 促生长能力 选择性 微生物实验室规范 培养基储存 制备培养基的储存，注意 ——低于0℃，凝胶结构破坏 ——避光 避热 ——琼脂培养基密封 融化 ——重复融化应被限制（不超过一次），防止过度加热或潜在污染 ——融化时，使用 水浴或流通蒸汽 微波炉，热板要防止过度加热 ——融化的培养基储存 在40~45℃水浴不应超过8小时 浇制平皿前擦干 微生物实验室规范 培养基储存 培养基应标示 ——批号，制备批号 ——制备日期，有效期 ——培养基名称 有效期确定 ——根据成分，配方，容器，储存条件等确定 ——生长能力试验数据支持 微生物实验室规范 培养基储存 培养基应根据生产商的说明书，并在验证过的条件下储存 培养基储存不得超过有效期 重要区域环控用培养基必须 ——双层包装 ——最终灭菌，否则进行全数预培养及用前检查 微生物实验室规范 培养基质控测试 所有待用的培养基应检查： ——生长能力 每批制备的培养基均需进行 测试菌种根据药典，供应商说明及环境中分离得到的菌株 生长能力测试不合格 —调查 —不得使用该批号 ——无菌 ——pH，±0.2 ——容器/平皿的完整性 ——抑制或指示能力 定期稳定性检查以确认储存效期 微生物实验室规范 微生物菌种保藏 —建立标准程序处理、保存菌种。防止污染和特性变化 —必须小心地处理 —使用前确认菌种的身份，纯度 —根据生产商说明书复苏菌种，使用接种技术 — -70℃以下或冷冻干燥保存储备菌种，可延长保存周期 —开启后不要重新冷冻菌种 —追溯传代次数，不超过五代 微生物实验室规范 实验室设备维护 —绝大部分实验室设备需要进行标准的验证（IQ、OQ、PQ） —定期校准、保养 —定期进行性能检查 —根据设备的特性和使用状况确定频率 —定期清洁、消毒 微生物实验室规范 实验室布局和运作 实验室布局应该有利于实验室运作 —防止交叉污染 —活动分区 无菌、环控样品的处理和培养应在无菌环境中进行 —注意安全 实验室应通过不同的进入通路和隔断来区分“洁净”区和“阳性”区，包括更衣，清洁，消毒，洁净区的生物安全柜仅用于无菌和洁净的操作 当样品发现微生物生长，后续的工作应转移至“阳性”区 微生物实验室规范 实验室布局和运作 —在无菌条件下小心地对物料进行取样 —环控培养基应在待取样区域环境中放入环控设备并小心的操作 —无菌隔离装置技术的使用可能是有效的 微生物实验室规范 样品处理 —大部分样品，水或环控样品中的微生物对操作、储存环境敏感。 产品处方、容器材质、储存时间/温度 —减少样品，取样与测试间的间隔时间，并控制储存条件。 —远距离的转移需确认转移条件对测试及样品的影响。 —可能的话，在无菌条件下，使用无菌技术取样，即使是非无菌样品。 —取样记录 样品信息、取样日期、送样日期、人员/部门，实验室样品，接受及确认 微生物实验室规范 培养基培养时间 培养时间短于3