生物科学专业论坛冷点问题讨论 ——凌波丽个人总结 第六季（整理版）.pdf

小木虫生物综合版与分子生物版冷点问题讨论 凌波丽 个人总结 第六季 1.蛋白跑胶 hebingxiao /bbs/viewthread.php?tid=7738492 初始悬赏金币 5 个 silicare: 分子生物 转移到 生物科学综合 2014-08-0608:33 先用凝血酶酶切蛋白后进行液相色谱C18柱分离，分离后进行蛋白跑胶，什么也跑不出来； 认为是蛋白浓度太低，就进行了浓缩，还是什么也跑不出来。请问各位跑不出来的可能原因。 （过液相色谱是A液是99.9%的水，0.1%的甲酸，B液是99%的甲醇，9.9%水，0.1%的 甲酸） 凌波丽 【答案】应助回帖 SDS电泳是根据蛋白质的分子量大小不同来分离蛋白质混合物的，兼有蛋白质携带的 电荷、蛋白质的分子形状、凝胶内的电场分布等因素的影响具有简单快速的特点，但是分辨 率不高，在电泳胶上看到的一条带中，往往多于一个蛋白质，甚至一条带中有多达10种蛋 白质分子。即使是在二维电泳，先经过等电聚焦后的分离不同的蛋白质分子，再用SDS 电泳第二次分离，仍然会使表达量低的蛋白质被掩盖在高表达量的蛋白质的电泳斑中。 反相层析柱的分辨率高一些，能够分离提纯出更低浓度的蛋白质，在SDS电泳的一条 带的样品中，可