天然黄杨生物碱KBA01靶向突变p53抗肿瘤作用机理初探.doc

分类号______________ 　　　　密级______________ U D C_______________ 硕士毕业论文 天然黄杨生物碱KBA0153抗肿瘤作用机理的 v 指导教师姓名、职称 学 科 专 业 细胞生物学 肿瘤药理学 论 文 提 交 时 期 2016  Mechanism of action of Natural boxwood alkaloids KBA01 targeting mutant p53 By Wei Wu A dissertation submitted for the degree of Master of Science at the KUNMING UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY 2016  昆明理工大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名： 日 期： 年 月 日 …………………………………………………………………………… 关于论文使用授权的说明 本人完全了解昆明理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅，学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印或其他复制手段保存论文。 （保密论文在解密后应遵守） 导 师 签 名： 论文作者签名： 日 期： 年 月 日 摘 要 恶性肿瘤严重威胁着人类的健康，其中结直肠癌的致死率排在世界第三位，我国结直肠癌发病率和死亡率逐年升高，现阶段针对肿瘤治疗大多是手术、放化疗等，但患者治疗后常表现存活期较短，预后效果较差。许多抗肿瘤药物是从天然植物中获得，这些小分子药物可以对肿瘤采取精准的分子靶向治疗，然而这些天然植物药物在治疗肿瘤中所占份额较少，同时药理机制也有待完善。 野生型p53（wtp53）为抑癌蛋白，是一转录因子，具有调控细胞周期、细胞凋亡、衰老等功能，在肿瘤中发生超过50％的p53突变，超过2000多种p53突变类型，即突变p53（mutp53）在肿瘤细胞中高表达，结肠癌、乳腺癌和肺癌中较常见，肿瘤细胞中，具有分子伴侣作用的热休克蛋白（癌细胞中往往高表达，是肿瘤治疗的靶点）Hsp90、Hsp70、Hsp40等与突变p53形成复合体53，导致突变p53半衰期延长（超过24h），常在细胞内聚集，很难被降解，从而具有一些获得性功能（Gain of function，GOF）促进肿瘤的发生发展，所以突变p53也就成为了肿瘤治疗的靶点。 癌细胞中，需要更加全面地了解突变p53的获得性功能（GOF），才可能找出更多的肿瘤治疗靶点。如突变p53能够促进t Shock Factor 1，HSF1）磷酸化，进而热休克反应Heat Shock Response，HSR），就会表达具有分子伴侣的Heat shock proteins，Hsps），如/72、Hsp40和Hsp27等，53复合体的作用，因此许多Hsp90抑制剂具有抑癌功能，但同时这些小分子化合物能够激活HSF1（肿瘤中往往表达量较高，是肿瘤治疗的新型靶点），启动热休克反应，形成负反馈调节， 天然黄杨生物碱KBA01来自小叶黄杨的提取物，在治疗心血管疾病方面的研究较多，然而在抗肿瘤方面的研究较少，发现的黄杨生物碱KBA01的活性结构与Hsp90抑制剂雷公藤中南蛇藤素（celastrol）的结构有相似部分。前期研究发现黄杨生物碱KBA01对含有p53R273H突变的结肠癌细胞HT29的细胞毒活性较强，其细胞毒活性是野生型p53的结肠癌细胞HCT116的4倍，是正常人胚肺细胞MRC-5的10倍，所以我们选择结肠癌HT29（p53R273H）细胞作为后续的抗肿瘤活性研究。 我们研究发现黄杨生物碱KBA01对HT29细胞有杀伤作用，影响了肿瘤细胞的生长，改变了HT29细胞的形态，抑制了HT29细胞的克隆形成，同时能够降低突变p53R273H蛋白的表达，降低HSF1和磷酸化HSF1（p-Ser326）的表达，能够降低热休克反应，克服了一些Hsp90抑制剂负反馈激活HSF1的作用，进而降低了53稳定的复合体解聚，导致突变p53稳定性下降，同时降低了突变p53R27