婴幼儿配方乳粉胆碱的测定修改说明.doc

婴幼儿配方乳粉胆碱的测定修改说明 1、任务来源、起草单位、验证单位和主要起草人 任务来源：国家标准化委员会 起草单位： 验证单位 ：黑龙江省乳品工业技术开发中心。 主要起草人： 2、原标准中胆碱测定方法简介 GB/T5413.20-1997中规定了酶比色法测定婴幼儿食品和乳粉中胆碱的方法。该方法是等同采用AOAC的方法。自1997年GB/T5413颁布以来，我中心开展婴幼儿配方食品和乳粉中胆碱的测定工作。经过长时间的大量试验，认为酶比色法测定胆碱的重现性、准确性都较好。由于该方法使用的两种酶制剂价格昂贵、全部需进口，且测定要求实验室条件较高，所以目前国内只有个别外资与国内几家大型乳粉企业使用该方法测定胆碱。而绝大多数企业(包括质检机构)由于受条件限制未采用此方法。2008年4月全国乳品标准化中心在哈尔滨组织召开了由多家乳品企业及质检机构参加的关于GB/T5413修订研讨会上，许多专家提出：为适应国内目前状况，能否增加较为操作简便、稳定性好的化学方法—雷氏盐比色法。我中心因在此之前已开展了对该方法的技术资料收集及方法的研究工作。会上一致决定由我中心负责起草该标准方法。 2005年我中心接受了国家标准化委会对《婴幼儿配方食品和乳粉通用检验方法》修订的工作。在此情况下,经多方查找资料，并进行了大量的试验验证后，认为雷氏盐比色法测定胆碱是一个较为经典、可靠的方法。该方法操作简便、测定重现性与再现性较好，不须特殊的仪器设备与试剂，一般实验室都具备条件， 利于各乳品企业使用等特点。 3、雷氏盐比色法测定胆碱的必要性及意义 胆碱（choline）是一种维生素，是人体所需要的重要营养素。胆碱是抗脂肪肝因子，可预防脂肪沉积以肝脏中，加速脂肪进入细胞的活动，帮助调节肝和胆囊的功能，可预防胆结石。缺乏胆碱会引起胃溃疡、胃出血、心脏疾病、肾管阻塞、动脉硬化等疾病。胆碱一般以磷酸胆碱或乙酰胆碱的形式广泛分布在卵磷脂、蛋黄、肝脏、啤酒小麦芽中。成年人可以从食物中获取，所以成年人中尚未发现胆碱缺乏者。对全部依靠婴幼儿配方乳粉提供营养的婴幼儿而言，胆碱也是必不可少的营养成分之一被添加到婴幼儿配方乳粉。作为配方成分之一，企业对产品质量监控与政府部门执法都需要建立相应的检测标准。原标准中测定胆碱的方法为酶比色法，由于该法存在较大的局限性，受条件限制，绝大多数企业等都无法采用该方法测定胆碱。为此在标准研讨会上许多代表建议增加适于企业采用且能准确测定胆碱的化学方法，以利于企业等对产品质量的监控。所以增加雷氏盐法是广大生产部门及多数质检机构所需，企业对确保产品质量及政府执法提供技术保障，具有重要的现实意义。 4. 制定标准的原则和依据。 在所查阅的很多文献中，雷氏盐比色法测定胆碱适应性较广，可适用于几乎所有的食品及添加剂等。目前在现行的国家标准GB/T17481-1998《预混料中胆碱的测定 分光光度法》、行业标准HG/T 2941-2004《饲料级 氯化胆碱》中，采用的就是雷氏盐法，方法原理与本方法基本相同，只是前处理及收集雷氏盐方法有所差异。 本方法研究借鉴于《营养学报》1993年6月第15卷第2期上发表的论文《婴儿奶粉集食品中胆碱的测定》。经过大量试验，进一步完善了实验条件，形成了现在的测定方法。在本实验条件下，测定胆碱的线性范围为0-5mg/mL，线性回归方程y=1.661400e-02+3.86303e*x；相关系数为0.9992。本方法与国标中方法相对照得到满意的结果。该方法与原国标中的方法进行了比对实验，通过对两方法测定结果进行的统计分析表明：两者测定结果见无显著差异。 标准主要条款的说明 5.1 范围 适用于婴幼儿配方食品和乳粉中胆碱的测定。 5.2 方法原理 食品中的胆碱包括游离态和结合态两种形态，用氢氧化钡－甲醇－氯仿混合溶液抽提水解．样液经过弗罗里硅藻土层析，与水解产物分离，在柱子上与雷纳克铵盐溶液形成粉红色的胆碱雷纳克盐，用丙酮溶解洗脱，于526nm测定吸收值． 样品处理 胆碱在奶粉及米粉样品中主要以磷酸胆碱和乙酰胆碱的形式存在，而强化胆碱主要以氯化胆碱的形式存在。首先要经过水解，水解的作用就是要使结合态的胆碱游离出来。称取10g左右的样品于磨口三角瓶中，加入50ml氢氧化钡－甲醇－氯仿抽提液，上接冷凝管，在79±2℃的水浴锅内水解４小时，不时地摇动三角瓶，使样品不结块．水解温度是样品前处理的关键控制点，因为水解温度会直接影响水解效果。温度过低容易使样品水解不充分；温度过高，又会因胆碱的不稳定性使其分解损失，造成结果偏低。所以要严格控制水浴温度，要选用恒温控制良好的水域锅。 5.4 实验使用试剂 5.4.1胆碱标准品 本实验使用的胆碱标准品没有采用氯化胆碱。主要是因为氯化胆碱极易吸潮，遇热不稳定，故采用酒石酸胆碱作标准品。酒石