利用定向进化提高基因工程大肠杆菌的甲醇利用能力.PDFVIP

生物技术通报 ·技术与方法· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2017, 33 9 :101-109 利用定向进化提高基因工程大肠杆菌的甲醇利用能力 1，2，3 2，3 2，3 2，3 1 王晓璐   王钰   刘娇   郑平   路福平  （1. 天津科技大学生物工程学院，天津 300457 ；2. 中国科学院系统微生物工程重点实验室，天津 300308 ；3. 中国科学院天津工业生物技术 研究所，天津 300308） 摘 要 ： 甲醇是一种重要的有机化工原料，价格低廉，碳还原度高，在生物化工中是糖质原料的理想替代原料。但是常用 的工业微生物宿主如大肠杆菌不能利用甲醇作为碳源，这限制了甲醇在生物化工领域的应用。通过表达甲醇脱氢酶、3- 己酮糖-6- 磷酸合成酶和6- 磷酸-3- 己酮糖异构酶在大肠杆菌中构建可同化甲醇的核酮糖单磷酸途径。以基因工程菌作为出发菌株，通过连 续传代和定向进化引入随机突变，突变株进行以甲醇为碳源的压力筛选，得到了2 株可以利用甲醇生长的突变株。在以甲醇为辅 助碳源的培养基中，25113Δ /pZWM 1-13 号突变株较原始菌株25113Δ /pZWM1 菌体生长量增加27.6%。对25113Δ / frmA frmA frmA 13 13 13 pZWM 1-13 号突变株进行 C 示踪分析检测蛋白质合成氨基酸，结果表明氨基酸中 C 比例有明显提高。其中，甲硫氨酸 C 标记 含量增加7.236%。 因此，定向进化有效地提高了基因工程大肠杆菌的甲醇利用效率。 关键词 ： 甲醇；核酮糖单磷酸途径 ；大肠杆菌；定向进化 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2017-0369 Enhanced Methanol Utilization in Genetically Engineered Escherichia coli by Directed Evolution WANG Xiao-lu1，2，3 WANG Yu2，3 LIU Jiao2，3 ZHENG Ping2，3 LU Fu-ping1 （1. School of Biological Engineering ，Tianjin University of Science and Technology ，Tianjin 300457 ；2. Key Laboratory of Systems Microbial Biotechnology ，Chinese Academy of Sciences ，Tianjin 300308 ；3. Tianjin Institute of Industrial Biotechnology ，Chinese Academy of Sciences ，