乙肝血清标志物与聚合酶链反应检测及临床意义的比较.DOCVIP

乙肝病毒血清标志物与HBV-DNA检测方 法及其临床意义的比较 随着免疫学和分子生物技术的迅速发展，检测乙肝病毒标志物的方法不断更新。目前使用的免疫学方法主要有酶免疫法，固相放射免疫法和免疫荧光法；分子生物学方法主要有核酸分子杂交法和聚合酶链反应等[1]。 乙肝病毒血清标志物的免疫学检测及临床意义 乙肝病毒血清标志物是目前诊断乙型肝炎最常用的指标，即俗称的“两对半”，主要反映人体对乙肝病毒的免疫反应状态。 1.简介检测乙肝病毒血清标志物的免疫学方法 检测乙肝血清标志物的酶免疫法中最常用的是酶联免疫吸附测定（ELISA），此法灵敏度较高，可达到纳克水平，如引入生物素和亲和素系统或采用化学发光等技术，其灵敏度还可进一步提高。近年来，由雅培公司推出的专利技术-----微粒子酶免分析法具有更高的灵敏度、特异度和稳定性[2，3]。固相放射免疫法，灵敏度同ELISA 处于同一级别，但因同位素半衰期短，并有放射污染问题，不如ELISA 常用。免疫荧光主要用于免疫组织化学。 2．传统乙肝血清标志物的临床意义 由于不同血清标志物代表不同的临床意义，只有明白单个指标的意义，才能够对不同血清标志物组成的各种血清学模式有一个正确的认识。（1）HBsAg是乙肝病毒感染的特异性标志，阳性见于急性乙肝的潜伏期、急性期及慢性乙肝病毒感染状态。（2）抗-HBs是保护性抗体，表示曾感染过乙肝病毒或注射过乙肝疫苗，是患者具有抗乙肝病毒免疫力的证据。（3）抗-HBc包括总抗-HBc，抗-HBcIgM及抗-HBcIgG。抗-HBc出现于乙型肝炎的急性期，恢复后可持续数月至数年，滴度逐渐下降。慢性乙肝感染者，抗-HBc持续阳性。抗-HBcIgM高滴度，抗-HBcIgG阴性或低滴度，有助于急性乙肝的诊断。抗-HBcIgM下降速度与患者病情相关，下降快，预后好，如滴度呈反复波动状态，提示有转为慢性肝炎的可能。抗-HBcIgG出现迟于抗-HBcIgM，主要见于恢复期和慢性感染状态。（4）HBeAg与HBcAg均由C基因区编码，其阳性和滴度可反映乙肝病毒的复制情况及传染性的强弱。急性乙肝HBeAg呈短暂阳性，如持续阳性表示转为慢性。HBeAg阴转，常提示乙肝病毒的复制明显减弱或停止。但研究发现，当与表达HBeAg有关的前C区基因发生突变时，可表现为HBeAg阴性，但HBV-DNA为阳性，这些乙肝病毒变异株与重型肝炎或肝炎慢性恶化有关。因此单以HBeAg作为乙肝病毒复制活跃与否的指标，是不够的[4]。（5）抗-HBe出现于急性乙肝的恢复期，可持续较长时间。慢性乙肝病毒感染时，HBeAg阴性伴抗-HBe阳转，通常表示无明显复制或复制水平较低，传染性也相对弱，但并非绝对无传染性。在肝硬变与肝癌病人中抗-HBe阳性，并不意味预后良好。 3．新的乙肝血清标志物的临床意义 前S1抗原和前S2 抗原均为乙肝病毒外壳蛋白的一部分，从广义上讲，也是HBsAg的一部分。它们的阳性率、滴度与HBsAg，HBeAg、HBV-DNA及DNA聚合酶有关。虽然研究者们对它的认识并不晚，但直到近年它们尤其前S1抗原才作为一种新的乙肝病毒感染标志物应用于临床。随着对前S1抗原在乙肝发病机制、病毒感染与复制等方面研究的深入，人们逐渐发现前S1抗原对乙肝的临床诊断具有越来越重要的临床意义[5] ，因此将其进行较为详尽的描述。 前S1抗原的检测通常采用ELISA双抗体夹心法检测，具有很高的灵敏度、特异度与可靠的精确度。 3．1前S1抗原与慢性乙肝病毒复制间的关系 以往研究认为HBeAg阳性，HBV-DNA阳性是反映乙肝病毒复制的标志，但后来发现部分HBeAg阴性，抗-HBe阳性的患者HBV-DNA为阳性，即部分抗-HBe阳转的患者仍存在病毒的复制。后来多项研究发现前S1抗原与HBV-DNA的检测率高度相关，是一项十分重要的病毒复制指标[6，7]。如Chemin I通过聚合酶链反应检测了73例乙肝患者 HBV-DNA ，同时采用特异性单克隆抗体检测了HBV前S1抗原。25名有症状的慢活肝患者, HBV-DNA均阳性, 除一名抗-HBe阳性的患者未检出前S1抗原，其余均阳性。在无症状HBsAg携带者, HBV-DNA、前S1抗原的阳性率分别为73%、50%。20名健康对照组无HBV标志物，转氨酶正常，HBV-DNA与前S1抗原均为阴性。连续检测一名急性乙肝患者与一名慢乙肝患者的HBV-DNA 和前S1抗原，发现两个标志物的变化是平行的。Zhang YY等在一组慢乙肝患者中利用生物探针原位杂交的方法检测了肝组织内HBV-DNA与肝细胞内HBsAg, HBcAg, 前S1和前S2 抗原。结果显示前S1和前S2 抗原的表达主要位于肝细胞胞浆内，有些位于胞膜上，前S1抗原阳性率高达75% (15/20), 显著高于前S2抗