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人用狂犬病疫苗中β―丙内酯残留量检测 　　【摘 要】 目的：检测人用狂犬病疫苗中BPL的残留量。方法：采用气相色谱法检测BPL含量，确定最低检出限，并分析BPL在37℃条件下的水解变化情况，检测人用狂犬病疫苗中的β-丙内酯的残留量。结果：气相色谱法检测BPL含量的灵敏度为8.96ppm，对人用狂犬病疫苗中的β-丙内酯进行检测，未发现残留。结论：气相色谱法检测BPL残留量的灵敏度较高，结果可靠，可用于人用狂犬病疫苗生产过程中BPL残留量的检测。 【关键词】 β-丙内酯（BPL） 气相色谱法 人用狂犬病疫苗 【中图分类号】 R446.1 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-8801（2014）03-0326-02 β-丙内酯（β-Propiolactone，BPL）又名羟基丙酸内酯，是一种杂环类化合物 （C3H4O2），沸点155℃，常温下为无色黏稠状有刺激气味的液体，对病毒具有很强的灭活作用，其灭活机制是作用于核酸，改变其结构以达到灭活目的，在不破坏病毒抗原的同时，又能保持病毒良好的免疫原性；BPL水解后为无毒性的人体脂肪代谢产物β-羟基丙酸，常用于病毒类疫苗特别是人用狂犬病疫苗的灭活。 但BPL是一种致癌物，对皮肤、黏膜及眼睛有刺激性，因此必须对疫苗中的BPL含量进行检测，确保其已被完全水解，保证疫苗的安全性。本文采用气相色谱法检测了BPL的残留量，并对人用狂犬病疫苗中是否有BPL残留进行了检测，现将结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 仪器与试剂 1.1.1 仪器 Agilent 公司7890A气相色谱仪。 1.1.2 试剂 β-丙内酯，购自德国SERVA，浓度1.146 g/ml。 PBS缓冲液（pH7.6）；人用狂犬病疫苗原液（以β-丙内酯灭活，批号T-RT-RT-RB2013003），由成都生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究室提供。 1.2 方法 1.2.1 气相色谱法分析条件 毛细管色谱柱为Agilent DB-624；载气为氮气，流速5ml /min；气化室温度180℃；检测器温度250℃；柱温120℃；进样量0.5μl。 1.2.2 绘制标准曲线 BPL用PBS缓冲液（pH7.6）作1：1000、1：2000、1：4000、1：8000、1：16000、1：32000、1：64000、1：128000、1：256000、1：512000稀释，分别进样，进行气相色谱法测定。以BPL含量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，同时以PBS缓冲液（pH7.6）作空白对照。 1.2.3 BPL重复性检测情况 BPL用PBS缓冲液（pH7.6）作1：4000稀释，进样6次，进行气相色谱法测定，考察BPL重复性检测情况。 1.2.4 BPL水解变化情况 BPL用PBS缓冲液（pH7.6）作1：4000稀释，37℃水浴水解，每隔30min抽样进行气相色谱法测定，检测BPL含量。 1.2.5 人用狂犬病疫苗原液中BPL水解情况检测 1.3 批人用狂犬病疫苗原液按1：4000比例加入BPL灭活，37℃水浴水解2h，抽样进行气相色谱法测定，检测BPL含量。 2 结果 2.1 标准曲线绘制 随着BPL稀释倍数的增加，色谱峰面积随之减小，当BPL稀释至1：512000 时，未检测出峰，结果见表1。空白对照无色谱峰出现。 根据1：128000稀释时的信噪比为2.9，确定本方法的最低检出限为8.96ppm，根据表1，以BPL含量为横坐标，峰面积为纵坐标作标准曲线，发现峰面积与BPL 含量呈线性关系，Y = 0.0741X + 1.9015，R2 = 0.997，标准曲线见图1。 2.2 BPL重复性检测情况 BPL用PBS缓冲液（pH7.6）作1：4000稀释，进样6次，进行气相色谱法测定，BPL保留时间分别为：3.015min、3.018 min、3.016 min、3.011 min、3.009 min、3.011 min，RSD为0.12%；BPL峰面积分别为：25.9、25.5、25.3、26.1、24.9、25.7，RSD为1.68%；两者均小于2%，表明用气相色谱法检测BPL残留的重复性良好。BPL色谱图见图2。 2.3 BPL水解变化情况 BPL用PBS缓冲液（pH7.6）作1：4000稀释，37℃水浴水解后进样检测，用标准曲线计算BPL含量。结果显示，随着水解时间的延长，BPL含量逐渐降低，水解3.0h后降至最低检出限以下，见表2。 2.4 人用狂犬病疫苗原液中BPL水解情况