血红蛋白的提取和鉴定.ppt

课题五---血红蛋白的提取和分离 电泳图结果 The End * * * 蛋白质的提取和分离一般分为四步： 1、样品处理 2、粗分离 3、纯化 4、鉴定 1.样品处理 血液 血浆 水分 固体物质 血浆蛋白 无机盐 磷脂 葡萄糖等 血细胞 白细胞 血小板 红细胞 （最多） 血红蛋白 （ ） 两个a肽链 两个β肽链 共四条肽链 90％ ①目的：去除杂蛋白 ②方法：低速短时间离心去除血浆，再加入生理盐水洗涤，离心。 1.样品处理 1）目的：释放血红蛋白 加（ ）到（ ）体积，再加40％体积的（ ）（ 溶解细胞膜） ，置于（ ）上充分搅拌10分钟（加速细胞破裂）, 细胞破裂释放出血红蛋白. 2) 分离血红蛋白溶液：以2000r/min的速度离心10 min ，试管中的溶液分为4层: 原血液 甲苯 磁力搅拌器 蒸馏水 1.样品处理 分离血红蛋白溶液 有机溶剂 （无色透明的甲苯层） 脂类物质 （白色脂溶性物质沉淀层） 血红蛋白溶液 （红色透明液体） 红细胞破碎物沉（暗红色沉淀物） 2、粗分离 a目的： b原理： 除去样品中分子量较小的杂质 透析袋能使小分子自由进出，而大分子保留在袋内。 用到的方法----透析 20mmol/L磷酸缓冲液 1mL 透析血红蛋白 透析过程动画演示 3、纯化 a方法： 凝胶色谱法 凝胶：是一些微小的多孔球体（内含许多贯穿的通道)，由多糖类化合物构成,如葡聚糖、琼脂糖。 b原理：是根据相对分子质量的大小 分离蛋白质的有效方法。 c 凝胶色谱的具体过程 样品的加入和洗脱 大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快； 小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢。 凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示 4、鉴定 原理：蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移 率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。 为了消除净电荷对迁移率的影响，可以在凝胶中加入SDS（十二烷基磺酸钠）。 方法：电泳 练习巩固 1、随着人类跨入蛋白质组时代，对蛋白质的研究和应用越来越深入，首先要做的一步是 A 弄清各种蛋白质的空间结构 B 弄清各种蛋白质的功能 C 弄清各种蛋白质的合成过程 D 获得高纯度的蛋白质 2、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是 A 相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质 B 相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质 C 相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质 D 二者根本无法比较 3、使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于 A 电荷的多少 B 分子的大小 C 肽链的多少 D 分子形状的差异 4、在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是 A 调节pH B 维持红细胞的能量供应 C 防止微生物生长 D 防止血液凝固 * *