玉米纹枯病菌全长cDNA文库的构建与鉴定-植物病理学报.PDF

植物病理学报 ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ　 ４４(６):６０３￣６０８(２０１４) ｄｏｉ:１０.１３９２６/ｊ.ｃｎｋｉ.ａｐｐｓ.２０１４.０６.００６ 玉米纹枯病菌全长ｃＤＮＡ 文库的构建与鉴定 ∗ 孔婷婷ꎬ高增贵 ꎬ张硕ꎬ王敏ꎬ周艳波ꎬ王小皙 (沈阳农业大学 植物免疫研究所ꎬ沈阳１１０８６６) ＴＭ 摘要:以玉米纹枯病菌菌丝为材料ꎬ利用Ｉｎ￣Ｆｕｓｉｏｎ ＳＭＡＲＴｅｒ ｃＤＮＡ Ｌｉｂ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ构建玉米纹枯病菌全长ｃＤＮＡ文 ６ －１ × 库ꎮ 文库质量鉴定结果表明ꎬ文库滴度为１.２ １０ ｐｆｕ ｍＬ ꎬ重组率为９９.２％ꎬ插入片段平均长度大于１.０ ｋｂꎮ 随机挑取 ４００个白色克隆进行测序ꎬ共获得３２９个高质量ＥＳＴ序列ꎬ经聚类拼接后得到２５０条ｕｎｉｑｕｅ ＥＳＴꎬ包括３６条ｃｏｎｔｉｇｓ和２１４ 条ｓｉｎｇｌｅｔｏｎｓꎮ 在ＧｅｎＢａｎｋ 进行Ｂｌａｓｔｎ 与Ｂｌａｓｔｘ 同源比对ꎬ有２２７条ＥＳＴ 与已知核酸或蛋白有不同程度的同源性ꎬ占全部 ＥＳＴ 的９０.８％ꎬ其余２３条无任何同源性ꎬ占９.２％ꎮ 关键词:玉米纹枯病菌ꎻｃＤＮＡ文库ꎻ表达序列标签(ＥＳＴ) Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆ ａｆｕｌｌ￣ｌｅｎｇｔｈｃＤＮＡ ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ ＫＯＮＧ Ｔｉｎｇ￣ｔｉｎｇꎬＧＡＯ Ｚｅｎｇ￣ｇｕｉꎬＺＨＡＮＧ ＳｈｕｏꎬＷＡＮＧ ＭｉｎꎬＺＨＯＵ Ｙａｎ￣ｂｏꎬＷＡＮＧ Ｘｉａｏ￣ｘｉ　 (Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙꎬＳｈｅｎｙａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＳｈｅｎｙａｎｇ １１０１６１ꎬＣｈｉｎａ) Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ａ ｆｕｌｌ￣ｌｅｎｇｔｈ ｃＤＮＡ ｌｉｂｒａｒｙ ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｈｙｐｈａ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ ｂｙ ｕｓｉｎｇ Ｉｎ￣Ｆｕｓｉｏｎ ＴＭ ６ －１ × ＳＭＡＲＴｅｒ ｃＤＮＡ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ. Ｔｈｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｌｉｂｒａｒｙ ｈａｄ ａ ｈｉｇｈ ｔｉｔｅｒ ｏｆ １.２ １０ ｐｆｕ ｍＬ ａｎｄ ａ ９９.２％ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅꎬｏｆ ｗｈｉｃｈ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｓｅｒｔｅｄ ｃＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｗａｓ ａｂｏｖｅ １.０ ｋｂ. Ｔｈｅ ３２９ ｈｉｇｈ ｑｕａｌｉｔｙ ＥＳＴｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ４００ ｗｈｉｔｅ ｃｌｏｎｅｓ ｐｉｃｋｅｄ ｒａｎｄｏｍｌｙ. Ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｏｆ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ａｎｄ ｓｐｌｉｃｉｎｇꎬ２５０ｕｎｉｑｕｅＥＳＴｓｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄꎬｉｎｃｌｕｄｉｎｇ３６ ｃｏｎｔｉｎｇｓａｎｄ２１４ ｓｉｎｇｌｅｔｓ.Ｔｈｅｓｅｕｎｉｑｕｅ ＥＳＴｓ ｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｆｏｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｈｏｍｏｌｏｇｙｗｉｔｈＢｌａｓｔｘａｎｄＢｌａｓｔｎ ｓｏｆｔｗａｒｅａｇａｉｎｓｔ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｉｎｔｈｅＧｅｎＢａｎｋ. Ｏｕｔ ｏｆ ｔｈｅ ２５０ ｕｎｉｑｕｅ ＥＳＴｓ ꎬ２２７ＥＳＴｓｔｈａｔ ａｃｃｏｕｎｔｅｄ ｆｏｒ ９０.８％ ｏｆ ａｌｌ ｔｈｅ ｕｎｉｇｅｎｅｓ ｓｈｏｗｅｄ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｋｎｏｗｎ ｇｅｎｅｓ ｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎｓꎬｗｈｅｒｅａｓｔｈｅ ｒｅｓｔ ｔｈａｔ ａｃｃｏｕｎｔｅｄ ｆｏｒ ９.２％ ｈａｓｎｏ ｈｏｍｏｌ