戊己丸活性代表成分在大鼠肝脏中分布探究.docVIP

戊己丸活性代表成分在大鼠肝脏中分布探究 　　[摘要]采用L9（34）正交设计将戊己丸中黄连，吴茱萸，白芍提取物组成9组配伍方，以及相应剂量的单味药方，共计18个方。建立并采用UPLC-MS/MS方法测定并比较不同配伍方代表成分小檗碱、巴马汀、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、芍药苷在大鼠口服给药2 h后在肝脏中的浓度比较戊己丸不同配伍方中有效成分在大鼠肝脏中的浓度。结果显示戊己丸配伍方中有效成分在肝中的浓度与相同剂量的单味药组方存在明显差异，相同剂量配伍方之间也存在差异。黄连与低、高剂量吴茱萸中吴茱萸碱浓度成正相关，吴茱萸与低剂量黄连中小檗碱的浓度成负相关，与中剂量黄连中小檗碱的浓度成正相关，与中剂量白芍中芍药苷浓度成正相关。白芍与中剂量黄连中巴马汀浓度成负相关、与中剂量吴茱萸中吴茱萸碱、吴茱萸次碱浓度成负相关。提示了黄连、吴茱萸、白芍之间相互作用导致了各活性成分在肝中分布的差异，分析显示各代表成分2 h在肝中浓度最大的配伍比为12∶6∶6。 [关键词]戊己丸；配伍；肝脏分布 戊己丸是临床上治疗肠易激综合症、胃溃疡等消化道疾病的常用方剂，是收录于2010年版药典中的经典名方，其在《幼幼新书》、《太平惠民合剂局方》、《医方考》等历代医书中均有记载。戊己丸由黄连，吴茱萸和土炒白芍3味药组成，然历代医书中记载的戊己丸配伍比例却不尽相同，2010年版药典收录戊己丸由黄连-吴茱萸-土炒白芍 6∶1∶6组成[1]。有研究表明，戊己丸配伍不同，其药效也不尽相同。王娅杰等[2]通过比较戊己丸提取物黄连-吴茱萸-白芍12∶2∶3与12∶1∶12的优选方对豚鼠离体结肠运动的影响，发现二者均可抑制乙酰胆碱诱导的结肠运动亢进，却呈现出不同的作用特点和优势。宫海民等[3]比较了2种不同配伍比例的戊己丸的药效，发现黄连-吴茱萸-白芍1∶1∶1时长于镇痛，5∶1∶1时长于抗炎。为此，本课题组采用药代动力学的技术和手段，通过研究和比较戊己丸不同配伍组方有效成份在体内的吸收和处置情况，探究各单味药之间的相互作用和配伍规律，进而阐释戊己丸的配伍原理及机制。 肝是机体的最重要的代谢器官。课题组前期通过血药浓度-时间曲线[4]以及体外肝微粒CYP450酶代谢模型[5-6]、肝灌流模型[7]研究发现，戊己丸配伍不同，体内的药代动力学参数、对肝中CYP450酶的影响以及肝脏对各代表成份的摄取均存在明显的差异。然而，药物通常要分布到肝实质细胞里才能跟细胞内的代谢酶发生相互作用（生物转化或影响代谢酶活性）抑或通过胆汁排泄[8]。因此，了解药物在肝脏中的分布有着重要意义。 本实验在之前研究的基础上，采用正交设计，将戊己丸三味药的提取物组成不同配伍方，以期通过研究各配伍方的在肝中的分布特征，更为深入的了解药物在肝脏乃至体内的处置过程，同时冀求从分布的角度探索戊己丸配伍的规律及意义，为更深入的研究戊己丸的配伍机制提供基础。 1材料 1.1动物 雄性Sprague-Dawley大鼠，SPF级，体重（220±20） g，中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所提供，合格证号SCXK（京）2009-0017。在恒温，光照周期12 h∶12 h环境中饲养3 d后实验。 1.2仪器 超高效液相色谱-质谱联用仪（Waters Xevo TQ MS-AcquityUPLC System，Masslynx V4.1工作站）；MSU225S-000-DU型1/10万电子分析天平（德国Sartorius公司）；Potter S型匀浆机（德国Sartorius公司）；VX-Ⅲ型多管涡旋振荡器（北京踏锦科技有限公司）；NA-5L型氮空一体机（北京中兴汇利科技发展有限公司）； Centrifuge 5424R型低温高速离心机（德国eppendorf公司）；Milli-Q Advantage A10超纯水系统（美国Millipore公司）。 1.3试剂与试药 盐酸小檗碱（Ber，批号110713-201212），盐酸巴马汀（Pal，批号110732-201108），吴茱萸碱（Evo，批号110802-200606），吴茱萸次碱（Rut，批号110801-201006），芍药苷（Pae，批号110736-201136），盐酸苯海拉明（Dip，批号100066-200807），栀子苷（Gar，批号110749-200714），对照品均购自中国食品药品检定研究院。乙腈，甲醇，甲酸均为色谱纯（美国Fisher公司）。高纯水（自制）。 黄连提取物、吴茱萸提取物、白芍提取物由中日友好医院药剂室提取，得率分别为19.3%，17.7%，9.37%，均为真空干燥固体粉末。其中各提取物中代表成分的质量分数分别为：黄连提取物中Ber 23.03%，Pal 5.52%；吴