干酪乳杆菌产抑菌物质的发酵条件优化及其制剂的功能评价Optimization of fermentation conditions of Lactobacillus casei producing bacteriostat and evaluation of its preparation.pdfVIP

万方数据 项目资助 动物源食品安全生产技术研发 （安徽省自主创新专项 项目编号：13Z03090） 禽防御素食品级益生菌基因工程系统构建与评价 （国家“863”计划 编号2006AA10Z320 ） 万方数据 万方数据 摘 要 畜禽产品中的药物残留和耐药性菌株的污染等问题，已经严重影响了其产品品 质。抗菌肽因其抗菌谱广且高效、不易产生耐药性等优点，成为抗生素的理想替代品， 是目前国内外研究的热点。而含抗菌肽的复合微生态制剂作为一种新型绿色饲料添加 剂，不仅具有抗菌肽的抗菌效果，还兼具益生菌的益生作用，有广阔的应用前景。 为研发一种新型饲用含抗菌肽的微生态制剂，本研究以产抗菌肽的乳杆菌为研究 对象，对其进行特性分析并优化其发酵条件；将其与已构建表达成功的重组AvBD9 毕赤酵母菌制成复合制剂，通过平均日增重、免疫器官指数及肠道菌群的变化，分析 该复合微生态制剂对肉鸡的功能评价，具体研究内容与结果如下： 1、产抑菌物质乳杆菌的筛选 采用琼脂扩散法，以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌，对嗜酸乳杆菌、发酵 乳杆菌和干酪乳杆菌三株乳杆菌的发酵上清液抑菌活性进行比较分析；在排除有机酸 和过氧化氢的干扰后，发酵上清液仍具有较强的抑菌活性；经胰蛋白酶处理后，抑菌 活性丧失。上述结果表明，在相同条件下，干酪乳杆菌的发酵上清液具有较强的抑菌 活性且其发酵上清液中的抑菌物质具有蛋白质属性。 2 、干酪乳杆菌产抗菌肽发酵条件的优化 探讨了发酵时间、温度、接种量、装液量这四个因素对干酪乳杆菌产抗菌肽的影 响，以获得产生抗菌肽的最佳发酵条件。首先对这四个因素单独分析，然后选择合适 的水平进行正交实验。结果显示，干酪乳杆菌在装液量20% 、接种量2% 、培养温度 30 ℃下静置培养42h后，其发酵上清液的抑菌活性最强。 3 、干酪乳杆菌源抗菌肽的特性分析 对干酪乳杆菌源抗菌肽进行了特性分析，蛋白酶酶解试验显示，该抗菌肽可被胰 蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶完全酶解，被蛋白酶K部分酶解，而不被胃蛋白酶 酶解；发酵上清液对温度、pH值的稳定性试验结果显示，该抗菌肽具有较好的热稳 定性，其活性受pH影响很大，酸性环境中活性较高；同时，对其作用方式的研究发 现，其对大肠埃希氏菌的作用为杀菌；抗菌活性研究表明，发酵上清液对常见病原菌 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、巴氏杆菌、铜绿假单胞菌等均有不同程度的 抑制作用，但对白色念珠菌、毕赤酵母无显著抑菌活性。 4 、干酪乳杆菌和重组AvBD9 毕赤酵母菌复合制剂对肉鸡的功能评价 将干酪乳杆菌和重组AvBD9 毕赤酵母菌按照 1:1 的比例配比成复合制剂，通过 测定平均日增重、免疫器官指数、肠道菌群动态变化等分析该复合制剂对肉鸡的功能 评价。选取 1 日龄肉鸡为对象，试验期 42d ，将其分为四组，I 组为空白对照组，II I 万方数据 组为干酪乳杆菌组，III 组为重组AvBD9 毕赤酵母组，IV 组为复合制剂组。结果表明， II 、III 、IV 组和I 组相比，均可提高肉鸡的平均日增重和免疫器官指数且IV 组结果 更显著（P0.01 ）；肠道细菌基因间重复序列扩增（ERIC-PCR 法）结果显示，II 组、 III 组、IV 组对肉鸡的肠道优势菌群和菌群结构均有影响，IV 组对肠道菌群影响显著， 能增强肠道菌群的多样性和提高种群密度，并使优势菌群在盲肠和回肠较早的进入稳 态。 上述研究表明，通过乳杆菌源抗菌肽抑菌活性的比较及其特性分析，筛选了一株 产抗菌肽的抑菌活性较高的干酪乳杆菌；通过条件优化，获得了乳杆菌产